猪流行性腹泻病毒S基因序列分析及原核表达.pdf

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1、万方数据SequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusThesi：submittedt01heslsSUl3ttedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfOrtheDegreeofMasterofAgronomy，●一一BiYumin(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．YinYan·boQingdao．ChinaJune，20

2、14万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生躲獭帆沁妒年口红咖关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表

3、、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：毕王：敏导师签名：尹时间：加t垆年'，6月步日时间：矽LV年J6月6-H万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要猪流行性腹泻病毒S基因序列分析及原核表达摘要为调查近期送检地区猪腹泻的发病原因，本研究设计了针对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒，猪轮状病毒的引物对送检样品进行检测。结果显示，高密、龙13、上海地区的病料中含有猪流行性腹泻病毒。经仔猪感染实验证实近期仔猪腹泻是由猪流行性腹泻病毒造成的，这为猪流行性腹泻病毒的流行病学调查提供了数据支持。为分析近期流行的猪流行性腹泻病毒S蛋白基因的序列，本研究设计了3对

4、引物对S基因全基因进行扩增、分析。结果发现近期流行的毒株同源性很高，国内外毒株之间的差异性较小，但与疫苗株差异较大，主要表现在第59．62位、140位增加了Q、G、V、N、N五个氨基酸，第163位到164位缺失了N、I两个氨基酸，这说明疫苗株变异造成新毒株流行的可能性很小。利用Anthe5．0和SignalP对S蛋白进行分析，发现信号肽切割位点均在N端第20位氨基酸处，GM、SH两个病料株有29个潜在糖基化位点，而LK、HG有28个潜在糖基化位点，其中HG病料株糖基化位点出现明显差异，这为分析PEDV的流行病学调查提供了理论依据。为获取具有免疫原性的PEDVS蛋白片段，并能有效研究其免疫原

5、性，本研究从毒株LK中扩增了S蛋白基因具有免疫原性的四个片段(Sa，Sb，Sc，Sd)，将得到的目的片段导入原核表达载体pGEX．6P．1中，转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。将表达的蛋白免疫家兔，分析其免疫原性。经SDS．PAGE和Westernblot分析鉴定，表达产物的分子质量约为Sa：61ku，Sb：46ku，Sc：41ku，Sd：43ku。经琼扩测出免疫后效价约为Sa(1：16)，Sb(1：32)，Sc(1：4)，Sd(1：16)。该研究表明表达的四段蛋白均具有免疫原性。这为后期亚单位疫苗的研制打下了基础。关键词：猪流行性腹泻病毒：S基因：序列分析：原核表达：抗原表位

6、万方数据青岛农业大学硕士学位论文AbstractSequenceandProkaryoticExpressionofSgeneofPorcineEpidemicDiarrheaVirusAbstractToinvestigatethepathogenofcausingdiarrheainswinesrecently,thisstudydesignedprimersforPEDV,TGEV,RVfortesting．TheresultsshowedthatsamplescontainedPEDVinOaomi，LongkouandShanghai．Animalinfectionexperim

7、entsconfirmeddiarrheawascausedbyPEDV．ItprovideddatatosupportepidemiologicalinvestigationofPEDVToanalyzethesequenceofPEDVSproteingene，thisstudydesignedthreepairsofprimerstoamplifyandanalyzetheSgene．Theresultsshowe