甲型h1n1流感病毒ns1蛋白核仁定位的研究

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1、中国动物传染病学报2012,20(3):12-16ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究赵宗正，涂加钢，张文婷，胡勇，周红波，金梅林（华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室，武汉430070）摘　要:为研究2009年甲型H1N1流感病毒的NS1蛋白的核仁定位情况，采用RT-PCR对其NS1基因进行了扩增，将其克隆至PEGX-KG载体，构建重组质粒KG-NS1，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达重组蛋白

2、。然后采用GST柱亲和层析方法纯化NS1重组蛋白，免疫家兔来制备多抗，Westernblot检测抗体。通过间接免疫荧光对表达不同长度NS1（NS1-219、NS1-230、NS1-237）的3种重组流感病毒进行了核仁定位的研究，3种重组毒的NS1蛋白存在于细胞核和细胞质，但都不能定位于核仁，说明NS1蛋白的截短与否并不影响其核仁定位，其生物学意义有待于进一步研究。关键词：甲型H1N1流感病毒；NS1；多克隆抗体；核仁定位中图分类号：S853.659.5:S852.43文献标志码：A文章编号：1674-6422(

3、2012)03-0012-05LOCALIZATIONOFNS1PROTEINOFH1N1INFLUENZAAVIRUSINNUCLEIZHAOZong-zheng,TUJia-gang,ZHANGWen-ting,HUYong,ZHOUHong-bo,JINMei-lin(StateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology,CollegeofVeterinaryMedicine,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,Chin

4、a)Abstract:InordertoinvestigatethedistributionofNS1proteinofH1N1InfluenzaAvirusof2009innuclei,theNS1genewasamplifiedinRT-PCRandclonedintoPEGX-KGvector.TheresultingplasmidKG-NS1wasthentransformedintoE.coliBL-21andtherecombinantproteinNS1wasexpressedwithinducti

5、onofIPTG.NS1proteinwaspurifiedusingGSTaffinitychromatographyandinjectedintorabbitsforthepreparationofanti-NS1polyclonalantibodies.Theproductionofrabbitanti-NS1antibodieswasdeterminedinWesternblotting.Then,thenucleiclocalizationofNS1proteinwiththreedifferentlen

6、gths(219,230and237aminoacids)wasexaminedinindirectimmunofluorescenceusingrabbitantibodies.TheNS1proteinwiththreedifferentlengthsaccumulatedinthenucleusandcytoplasmbutnotinthenucleolus.TheresultsshowedthattruncationofNS1proteindidnotaffectitsnucleoluslocalizat

7、ion.Keywords:H1N1InfluenzaAvirus;NS1;polyclonalantibody;nuclearlocalization流感病毒属于正粘病毒科，其全基因组由8个短几个月内迅速在全球范围内传播，引起了人们的分节段的负链RNA片段组成，共编码11种蛋白。广泛关注。甲型H1N1流感病毒是三源重配病毒，2009年4月份爆发于墨西哥的甲型H1N1流感在短PB2、PA来自H1N1禽流感病毒，PB1来自H3N2收稿日期：2012-04-11基金项目：国家973计划(2010CB534000)；转基

8、因生物新品种培育重大专项资助（2009ZX08009-141B）；国家科技重大专项课题（2008ZX10403、2009ZX10004-109）课题资助作者简介：赵宗正，男，硕士研究生，预防兽医学专业通信作者：金梅林，E-mail:jml8328@126.com第20卷第3期赵宗正等：甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究·13·人流感病毒，HA、NP、NS来自北美经典H1N1猪