四株刺参益生菌的发酵工艺及实验性养殖应用效果分析

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1、中国海洋大学硕士学位论文四株刺参益生菌的发酵工艺及实验性养殖应用效果分析姓名：元福杰申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：潘鲁青；王印庚201206四株刺参益生菌的发酵工艺及实验性养殖应用效果分析摘要本研究以4株分离自健康刺参肠道的益生菌Aj0807181A一15，A．j080719lA—12，Aj080719lA一16和Aj0807181A一25为对象，在实验室条件下进行了简易发酵配方优化和发酵条件优化实验，确定了4株有益菌的最佳发酵配方和发酵条件参数；并通过室内饲养刺参，评估了施用4株益生菌对刺参生长、

2、免疫力和对刺参肠道菌群及养殖水环境微生态结构的影响；另外，针对4株益生菌对常见水产养殖动物的安全性进行了检测和观察。在上述研究基础上开发出了两种刺参有益菌制剂，包括一种单体制剂和一种复合制剂。本论文主要研究成果如下：1．首先通过单因素实验确定了4株益生菌的最佳发酵条件；同时经过单因素实验和正交实验确定最佳发酵培养基配方，在此基础上进行了10L发酵罐中试发酵试验，建立了一套实验室条件下益生菌的发酵工艺。以芽孢形成时间确定了最佳发酵时间32h，最佳发酵条件，温度28℃，初始pH7．5，接种量5％，转速170rpm；

3、最优发酵培养基配方为葡萄糖2．59／L、豆粕粉15．／mL、氯化钠109／L。研究发现枯草芽孢杆菌对其他3株菌有强烈的生长抑制作用，故采取单株发酵工艺。2．通过施用益生菌开展刺参养殖应用实验，评价了使用有益菌制剂对刺参免疫酶活力、蛋白酶活力、生长、肠道菌群定植以及对养殖水环境微生态结构的影响，并通过灿烂弧菌(附打jD印』鲫出出s)攻毒试验，探究了使用益生菌对刺参抗病力的影响。实验表明：单一菌剂和复合菌剂都可以显著提高刺参肠道酸性磷酸酶(AKP)、碱性磷酸酶(ACP)和超氧化物歧化酶(SOD)活力(P

4、，对溶菌酶(LSZ)活力影响不显著；另外，显著提高肠道蛋白酶活力，复合菌剂最高可提高蛋白酶活力3倍；可明显提高刺参生长速度，复合菌剂最高特定生长率几乎可以达到对照组的2倍；一定浓度益生菌的加入可以显著影响刺参肠道和养殖水体的微生态结构，总异养菌数显著增加，而弧菌数量及比列明显降低；攻毒试验结果表明，浓度为106cfu／m1的复合益生菌对刺参抗灿烂弧菌的相对免疫保护率可以达到75％。3．观察分析了4株益生菌对常见海水养殖动物的安全性，主要包括刺参、鲍鱼、大菱IV鲆、花鲈、许氏平鼬和中国对虾。采取单菌株和复合菌剂浸

5、泡养殖动物15d，结果表明，106cfu／ml浓度的菌剂对上述动物是安全的，对生长、摄食和存活均无影响。本文研究确定了实验室条件下益生菌的发酵工艺，将为进行刺参益生菌的规模化生产发酵提供理论依据；证实了使用有益菌制剂对刺参生长、免疫酶活力、抗病力、蛋白酶活力、肠道菌群定植以及对养殖水环境微生态结构的正面影响；确定了有益菌的安全使用浓度，这将为有效、安全使用微生态制剂提供基础数据和技术支撑，对推动微生态制剂的广泛应用和建立海参矬康养殖工艺具有重要的现实意义。关键词：刺参；益生菌；发酵；免疫力；微生态结构；安全性V

6、Thefermentationtechniqueoffourstrainsofprobioticsandit’seffectin月J口Ds亡／c厅a：p“s-／ra：pD，7／c“scuItureAbstractThisstudyfocusedonfourstrainsofprobioticsAj080718lA．15，Aj0807191A．12，Aj0807191A—16andAj080718lA一25，whichwel．eis01atedf而mtheintestineofhealthyseacucumber

7、却Dsfjc，z9p淞却onic粥．BaSedontheexp耐mentalstudy，thebestfbmlentationformulaandthefbrnlentationconditionsweredeterminedfortllefourstrainsofbeneficialbact耐a．AndtheapplicationeffectoftheprobiotiGsinseacucumbercultllrewaSaccomplishedtllroughaseriesofindoorexperiments

8、，mainlyincludir玛thegrowth，immunityandmicroec0109icalchangesofseacucumber’sintestinea11dcultureenviroIllIlent．Thenthesafetyoftheprobioticswas锄alyzedtocommonaquaticaIlimals．Onthebasisofrcsearchwor