两株益生菌的鉴定及其在刺参(apostichopus japonicus)养殖中应用的研究

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1、中国海洋大学硕士学位论文两株益生菌的鉴定及其在刺参（Apostichopusjaponicus）养殖中应用的研究姓名：王军申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：田相利201206两株益生菌的鉴定及其在刺参养殖中应用的研究摘要刺参(彳pDsffc办印螂．旭pD聆配淞)属于棘皮动物门(Echillodemata)、海参纲(Holo恤．oidea)，是我国北方经济效益较高的、重要增养殖种类。刺参养殖主要分布在山东、辽宁、河北、江苏北部等地，2009年全国刺参养殖面积达到15．5万公顷，产量达到10．22万吨，产值超过200亿元，刺参养殖业已成为我国海水养殖的重要的特色支柱产业。然

2、而，相对于刺参养殖业迅速发展的养殖规模，与刺参养殖技术相关的基础研究相对滞后，制约了该产业的健康发展，导致刺参养殖相继出现了一系列问题，造成了较大的经济损失。例如，刺参病害问题日趋突出，出现了多种明显病症和大规模死亡现象，制约了刺参养殖产业的持续、健康、稳定发展，给养殖业者造成了巨大的经济损失。目前，我国水产养殖病害控制还以抗生素和化学消毒药物为主，养殖水体中长期使用抗生素和化学药物导致了一系列的环境和社会问题。为了缓解这一矛盾，近年来人们一直在寻找一种既能有效控制疾病同时又不会对养殖环境造成破坏的方法。益生菌因其在抑制病原微生物、调节养殖动物肠道微生态环境、增强养殖动物免疫力

3、、促进生长，且无污染、无残留、无毒副作用的特点，目前在水产养殖业中的应用正得到越来越多的关注。本论文研究了几株分离自养殖池塘的刺参潜在益生菌的生物学特性，并对其进行了分类鉴定。进一步的养殖实验效果验证了，2菌株均能明显促进刺参的生长，并提高刺参肠道消化酶和体腔液非特异性免疫酶活性，对刺参养殖环境微生物数量也有较大影响，是应用价值较高的刺参益生菌材料。具体研究结果如下：1两株刺参益生菌的鉴定及安全性检验结合形态观察、生理生化指标测定以及16SrElNA序列分析等方法对BC．1、BC．2两菌株进行了分类学鉴定。结果表明，2菌株均为蜡样芽孢杆菌(肋c棚淞cP陀螂)。其中，菌株BC一1

4、的适宜生长温度为18～39℃，最适生长温度为24℃；菌株BC．2适宜生长温度为18～39℃，最适生长温度为27℃。菌株BC一1的适宜生长盐度范围为0～30；菌株BC．2适宜生长盐度范围为0～35。菌株BC．1、BC．2适宜生长的pH值均为5．5～9．0之间，BC一1菌最适宜生长pH为7．5；菌株BC．2最适宜生长pH为6．5。而采用肌肉注射和浸浴两种方式对2菌株进行安全性检验均未发现其对刺参明显的负面影响，因此，该2菌株均可以作为进一步养殖效果研究的材料。2BC一2对刺参生长以及消化和非特异性免疫相关酶活性的影响研究了一株蜡样芽孢杆菌对刺参生长、消化和免疫相关酶活性的影响。芽孢

5、杆菌的添加量分别为107、109和1011c觚g(以活菌量计)，以投喂基础饲料组作为对照，实验时间为56d。实验过程中分别于实验中期和结束时测量刺参生长情况，并于实验结束时测定刺参肠道消化酶和体腔液非特异性免疫相关酶类的活性。结果表明：添加107和109c触g芽孢杆菌可以显著提高刺参的生长速度，降低刺参体重变异系数(正O．05)。刺参肠道蛋白酶活性与投喂的菌浓度呈明显的正相关，而淀粉酶活性则呈明显的负相关，但添加该芽孢杆菌对脂肪酶活性影响不大(p>0．05)。添加芽孢杆菌对刺参非特异性免疫相关酶类影响有所不同。在本研究的添加量范围内，刺参体腔液超氧化物歧化酶(SOD)活性显著提

6、高(p<0．05)；适量添加该芽孢杆菌可以显著提高刺参体腔液中酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(√蛐口)和溶菌酶(LSz)活性(庐0．05)。综合比较表明，芽孢杆菌BC．2的适宜添加量为109c6l／kg，对刺参的生长、消化功能和非特异性免疫能力均具有显著的促进作用。3BC．1不同施用方式对刺参生长以及消化和免疫功能相关酶活性影响的对比研究通过拌饵投喂及水体泼洒两种施用方式，研究了一株蜡样芽孢杆菌对刺参生长，消化、免疫相关酶活性及环境微生物数量的影响。两种投喂方式下各设3个不同的施用浓度，拌饵投喂实验组芽孢杆菌添加量分别为107、109、1011c向依g(以活菌量计)，水体泼洒

7、实验组芽孢杆菌添加量分别为106、108、1010C舢，m3，以投喂基础饲料为对照组，实验时间为56d。实验过程中每2周测定一次水体异样菌数量，实验中期和结束时测量刺参生长情况，并于实验结束时测定刺参肠道消化酶和体腔液非特异性免疫相关酶类的活性。实验结果显示：(1)整个实验期间泼洒组水体异养菌数量与对照比较一直处于较低水平，而拌饵投喂组水体异养菌数量前期显著高于对照组(正0．05)，随着实验进行两者之间的差距逐渐缩小直至消失；(2)生长方面，泼洒106c鼬『m3、拌饵投喂109c如瓜g的BC