几种微生态制剂对刺参(apostichopus japonicus)养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响

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1、中国海洋大学硕士学位论文几种微生态制剂对刺参（Apostichopusjaponicus）养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响姓名：阳钢申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：田相利201206几种微生态制剂对刺参(却Dsffc^叩“s_，印Dnic”s)养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响几种微生态制剂对刺参(却傩如^叩船歹印D刀记淞)养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响摘要刺参(彳pDsffc办Dp”J7印Dn七甜s)属于棘皮动物门(Echinodemata)、海参纲(HoIothroidea)，是我国北方经济效益较高的、重要增养殖种类。201

2、0年我国刺参养殖面积达到】5．5万公顷，产量达到13．02万吨，产值超过200亿元，刺参养殖业已成为我国海水养殖的重要的特色支柱产业。目前在刺参的育苗、保苗和养殖生产实践中，微生态制剂得到广泛的应用，也获得了养殖者的普遍认可。然而，人们对关于其作用机制至今仍了解不多。现有的研究也多集中于其对水质改善的效果、对养殖动物消化功能、免疫力以及生长等指标影响等方面，关于微生态制剂对刺参体内外环境中菌群结构的影响，却还鲜见报道。本研究将传统培养方法和DGGE指纹图谱技术相结合，研究了不同微生态制剂对刺参养殖水体和刺参肠道内细菌群落结构组成变化的影响

3、，以期为微生态制剂在刺参养殖的中合理使用以及相关作用机制研究提供理论依据。所获得研究结果如下：1．蜡样芽孢杆菌BC．1水体泼洒对刺参养殖水体、肠道细菌群落结构以及刺参生长的影响通过传统培养与PCR．DGGE相结合，研究了泼洒一株蜡样芽孢杆菌(肋cf刀淞cP坨甜J)对刺参生长和养殖水体和肠道中菌群结构的影响。蜡样芽孢杆菌泼洒浓度分别为106、108、1010c纠m3(分别命名为Bc6、BC8和BCl0)，每7d全量换水1次，以未泼洒芽孢杆菌制剂处理为对照2(CT2)。另外设置每隔3d全量换水1次的不泼洒芽孢杆菌制剂的处理做为对照组1(CTl

4、)。8周的养殖实验表明，BC6和BC8处理组刺参特定生长率则显著高于其它处理(P<0．05)，刺参个体差异也低于对照组。经传统2216E培养基涂布培养分离发现，蜡样芽孢杆菌泼洒第3d时，3个处理组水体样品中出现了蜡样芽孢杆菌菌落，但第7d时芽孢杆菌菌落均消失；实验结束后，取刺参肠道粪便样品涂布培养，3个处理组均出现了蜡样芽孢杆菌菌落。PCR—DGGE技术分析表明，刺参养殖水体中的优势菌群归几种微生态制剂对刺参(却∞，七向印“s_『qpD”七“s)养殖水体及刺参肠道菌群结构的影响属于C【．变形菌纲(0【．Proteobacteria)、1，

5、一变形菌纲(丫．Proteobacteria)、6一变形菌纲(6一Proteobacteria)、黄杆菌纲(Flavobacteria)、拟杆菌纲(Bacteroidetes)和疣微菌纲(Venucomicrobiae)，而芽孢杆菌纲(Bacilli)细菌在水体中未能形成优势菌群。刺参肠道内的优势菌群归属于0【．变形菌纲、Y．变形菌纲、￡．变形菌纲(￡一Proteobacteria)、黄杆菌纲、拟杆菌纲和芽孢杆菌纲。施用蜡样芽孢杆菌显著改变了刺参肠道的细菌群落结构，以对照组CT2为参照，刺参肠道内过路菌群中的黄杆菌纲和拟杆菌纲的相对含量有

6、明显下降，而芽孢杆菌纲细菌则在刺参肠道过路茵群中形成了占一定比例的细菌群落，并在BC6处理组中成为优势菌群，其相对含量为23．3％；使刺参肠道固定菌群中一株占有主导的丫．变形菌纲消失。本研究表明，水体中泼洒该芽孢杆菌制剂对水体和刺参肠道内菌群结构和丰度均具有显著影响，在适宜的泼洒浓度下可以有效提高刺参的生长速度、降低刺参生长的个体差异。2．复合微生态制剂水体泼洒对刺参养殖水体、肠道茵群结构以及刺参生长的影响通过传统培养与PCR．DGGE相结合，研究了泼洒复合芽孢杆菌制剂对刺参生长和养殖水体和肠道中菌群结构的影响。复合芽孢杆菌制剂由由枯草芽

7、孢杆菌(B口cf刀螂J“6rf凰)、蜡样芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌(B日cfff娜，fc乃P，z扣册括)按一定比例复配制作而成，其泼洒浓度分别为106、108、1010c如／m3(分别命名为WSR6、WSR8和WSRlO)，每7d全量换水1次，以未泼洒芽孢杆菌制剂处理为对照2(CT2)。另外设置每隔3d全量换水1次的不泼洒芽孢杆菌制剂的处理做为对照组1(CTl)。8周的养殖实验表明，WSR6和wSRl0处理组刺参特定生长率则显著高于其它处理，刺参个体差异则显著低于对照组(尸<0．05)。经传统2216E培养基涂布培养分离发现，复合微生态制剂泼

8、洒第3d时，仅WSRlO处理组水体样品出现蜡样芽孢杆菌菌落，但第7d时该处理组芽孢杆菌菌落消失：实验结束后，取刺参肠道粪便样品涂布培养，3个处理组均出现了蜡样芽孢杆菌菌落。PCR．DGGE技术