养殖刺参早期发育阶段菌群结构演替及潜在益生菌的筛选

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1、学校代码：10264研究生学号：M150104115上海海洋大学硕士学位论文题目：养殖刺参早期发育阶段菌群结构演替及潜在益生菌的筛选英文题目：StudyontheSuccessionofMicroflorainApostichopusjaponicusDuringtheEarlyDevelopmentalStagesandtheScreeningofPotentialProbiotics专业：临床兽医学研究方向：水产动物微生态学姓名：李靖指导教师：王印庚研究员二O一八年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪

2、守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内

3、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩时间养殖刺参早期发育阶段菌群结构演替及潜在益生菌的筛选StudyontheSuccessionofMicroflorainApostichopusjaponicusDuringtheEarlyDevelopmentalStagesandtheScreeningo

4、fPotentialProbiotics学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：上海海洋大学硕士学位论文养殖刺参早期发育阶段菌群结构演替及潜在益生菌的筛选摘要本文主要研究了养殖刺参(Apostichopusjaponicus)早期发育各阶段幼体消化道菌群结构变化，并分析了环境(培育用水、饵料)菌群结构对刺参幼体消化道菌群结构的影响，同时对分离自幼体消化道的菌株进行了益生菌的初步筛选，以期为解析刺参消化道菌群的形成过程和演替规律以及养殖用益生菌的筛选与应用奠定基础。主要研究结果如下：1.采用传统细菌培养方法，对

5、养殖刺参早期发育各阶段幼体体内及环境(投入饵料、培育用水)菌群的组成与结构展开研究，对分离的优势细菌进行分子鉴定，在此基础上进行了刺参幼体体内菌群结构与环境菌群结构相关性分析。细菌培养结果表明，在幼体开口及投喂饵料以后，耳状幼体和樽形幼体体内可分离获得可培养细菌，但数量级较低(101CFU/ind)；发育至稚参期以后，消化道可培养细菌总数急剧增加，并在4月龄时期达到108CFU/g数量级。可培养弧菌结果也呈现类似变化趋势，幼体体内可培养细菌中弧菌占比为2.2%~77.3%。对环境菌群的细菌培养结果表明，培育用水中细菌含量

6、变化不显著，随着幼体发育期饵料的转变，不同时期饵料中细菌含量差异显著，幼体体内细菌数量与饵料细菌总数存在显著相关性。自整个养殖系统中共分离到65株优势细菌，根据16SrDNA进行鉴定，结果表明所分离的65株优势菌归属于14个属43种细菌。各菌株在幼体及环境分布统计结果表明Halomonasalkaliantarctica为耳状幼体、樽形幼体共有优势菌；1月龄时期，Vibrioatlanticus、Vibrionatriegens是幼体、饵料、培育用水的共有优势菌，Bacillustequilensis是幼体、饵料的共有优

7、势菌；2月龄时期，Vibrioalginolyticus是消化道和饵料的共同优势菌；2月至4月龄时期，Vibriofortis是其消化道的共有优势菌；6月龄时期，Bacillussiamensis是幼体、饵料、培育用水的共有优势菌。相关性分析结果表明在幼体发育初期，其体内菌群与养殖用水的相关性较大，而随着幼体发育，其体内菌群结构与饵料的相关性逐渐增加。2.应用高通量测序技术，对养殖刺参早期发育各阶段幼体体内及环境(投入饵I上海海洋大学硕士学位论文料、培育用水)菌群的组成与结构展开更为深入的研究。自受精卵至樽形幼体时期，变

8、形菌门、拟杆菌门及蓝细菌门的总丰度始终达90%以上；自1月龄至4月龄稚参时期，随着蓝细菌门、浮霉菌门、疣微菌门总丰度的增加，变形菌门的比例大幅降低并在4月龄稚参时期达到最低水平，拟杆菌门的比例则始终处于较低水平(0.91%~3.73%)；在6月龄稚参时期，变形菌门又重新占据优势地位(80.32%)，而蓝细菌门、浮霉菌