碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞游离镁离子浓度的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞游离镁离子浓度的研究姓名：葛鲁敏申请学位级别：硕士专业：内科学专业指导教师：洪炳哲201205遵义医学院硕士学位论文中文摘要碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞内游离镁离子浓度调节机制的研究中文摘要目的：碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)对人脐带静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)内游离镁离子浓度([M孑+]i)的调节机制研究。方法：将新鲜脐带内灌注胶原酶消

2、化，冲洗，离心，获得内皮细胞，向血管内皮细胞中加入带有胎牛血清的M199细胞液制成细胞悬液，放入每孔内放置载玻片的24孔培养板中，置于37。C，5％C02的培养箱内进行细胞培养传代培养至2"--'4代，运用膜片钳全细胞技术破膜给药，采用荧光指示剂mag—tiara．2．AM，运用PTi阳离子测定系统动态测HUVECsI幂J[M92+]i。结果：在静息状态下HUVECsI拘[M92+]i为(O．52±0．02)mm01．L～。细胞外M92+浓度分别为0mm01．L一、1mm01．L一1和2mm01．L。1时，给予bFGF(10lag

3、．L-1)处理后，HUVECsI构I[M92+]i增加量分别为(0．78±O．13)mm01．L-l"(O．76±0．11)mm01．L一1和(0．74±O．14)mm01．L-1。细胞外M92+浓度为0mm01．L-1时，bFGF剂量的增加与其促进[M92+]i增加量有明显的剂量依赖性关系，且bFGF半数有效剂量是(12．03±1．08)pg·L-lo细胞外液中BAPTA—AM分别为100mm01．L。1和0lam01．L。时，bFGF(10lag．L-11促使HUVECsI拘I[M92+]i增加量分别为(O．78±O．14)m

4、m01．L-1和(O．76±O．11)mm01．L～。细胞外液中Na+为145mmol·LJ和0pm01．L。1时，bFGF(10Pg．L。)促使HUVECsI拘[M92+]i增加量分别为(O．76±0．12)mm01．L-1和(O．75±0．12)mm01．L～。用10lamol·L。1山羊免疫球蛋白(goatIgG)和10}tmol·L。1三磷酸肌醇激抗体(IPK3B．Ab)处理HUVEC后，FGF(10¨g·L。)使[M92+]i增加量分别为(0．76-4-0．17)mmol·L一1和(0．18+0．15)mm01．L一。结

5、论：bFGF通过三磷酸肌醇激酶信号传递途径增加血管内皮细胞的[M矿+】io关键词：碱性成纤维细胞生长因子；游离镁离子；l，4，5三磷酸肌醇激酶；膜片钳2ThemechanismofbasicfibroblastgrowthfactorinmediatingincreaseofintracellularfreemagnesiuminvesselendothelialcellsAbstractObjective：Themechanismofbasicfibroblastgrowthfactorinmediatingincreaseof

6、intracellularfreemagnesiuminhumanumbilicalveinendothelialcellsMethods：Bycollagenasedigestion，fleshhumanumbilicalcordswerewashedandcentrifugatedtogainedHUVECs．HUVECsweremaintainedinM199mediumsupplementedwith20％fetalbovineserumandplacedin24holecultivatedboardat37。Cina5％

7、C02incubator．Theprimaryculturedcellsusedinthisstudywerebetweenpassages2and4passages．Markedwiththefluorescenceindicatormag。fura。2-AMandBytheWholecellpatchclamptechnique，usingPTiionfluorescencemethodtodetect[M92+】iinHUVECsdynamically．Results：Atrestingstate，Themeanbasall

8、evelof[M92+]iintheHUVECswas(0．52±0．02)mm01．L～。InthepresenceofextracellularM92+0mm01．L～、1mmol·L-1and2mmol·L一，levelof[M92+]iin