肾移植术后受者bk病毒感染和bk病毒相关性肾病的前瞻性研究

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1、军医进修学院解放军总医院硕士学位论文肾移植术后受者BK病毒感染和BK病毒相关性肾病的前瞻性研究姓名：解俊杰申请学位级别：硕士专业：泌尿外科指导教师：钱叶勇2012-05-16军医进修学院硕士学位论文作者姓名：解俊杰学科专业：泌尿外科导师：钱叶勇肾移植术后受者BK病毒感染及眯病毒相关性肾病的前瞻性研究目的：中文摘要1、利用实时荧光定量PCR(Real-TimeFluorescentQuantitative，PCR)方法设计并建立BKV检测试剂盒，便于实验室对BKV进行简单快捷且大规模的筛选扣预测。2、研究肾移植术后受者无创性实验室检测(尿沉渣分析Deco

2、y细胞，尿、血标本检测BKVDNA载量)用于诊断BKV感染并预测BKVAN的价值，分析确定本实验研发的BK病毒检测试剂盒用于诊断BKV感染及预测BKVAN进展的标准值(范围)。3、通过单中心前瞻性的临床实验研究，分析影响BK病毒感染及并发BKVAN的危险因素。4、对BKV血症阳性和病理学诊断BKVAN的移植受者进行初步的临床干预治疗，评估疗效。方法：1、设计并建立实时荧光定量PCR方法检测BK病毒试剂盒：(1)根据针对BK病毒基因组自行设计特异性引物BKV-F和BKV-Rl,J．．，2．Taqman荧光探针BKV-P。(2)BK病毒DNA聚合酶链式反应

3、液的配制。(3)检测反应。(4)BK病毒样本的处理与DNA提取。(5)构建BKV定量标准品I．IV。(6)军医进修学院硕士学位论文反应结果判断。(7)结果验证：将检测FEl,}生的扩增产物进行基因测序，测序结果经BLAST比对后证实为BKV基因序列。(8)建立BK病毒检测试剂盒。2、研究肾移植术后受者无创性实验室检测方法价值：(1)根据制定的入组标准选择2010年02月01日至2011年01月31日在解放军第309医院器官移植中心进行同种异体肾移植术的"6例受者作为研究对象，分别在移植术前病毒检查及移植寨磐第0．5、钆3；。6、9、12和JIl5个月时

4、阮聂定期收集受者的尿液和外周血『

5、cP科标本≯进行尿脱落细胞形态学镜检(巴氏染色法)Decoy细胞，幕蘑厨本实验研爱的BKV检测谖剂盒检测尿和血标本中BKVDNA载量，记录检溅结果羞(2)对具备指征的移植术后受者行组织活检(在B超引导下)，对移植肾进行病理学诊断(普通染色及免疫组化法o3、将入选研究对象按照Decoy细胞阳性、病毒尿症(viruria)阳性、病毒血症(viremia)阳性和病理学确诊BKVAN分为四组，分别统计记录性别年龄免疫诱导方案供’肾类型术后并发糖尿病(PTDM)急性排斥反应和(AR)术后早期肺部感染(pneumonia)以及免疫

6、诱导方案、单独和联合免疫抑制方案等资料，统计肾移植术后BKV的发病率、发病趋势，分析BKV检测试剂盒诊断BKV感染并预测BKVAN的价值，确定诊断标准值(范围)，并进一步分析影响肾移植术后BKV感染及BKVAN的相关危险因素。4、依据国外参考文献资料，尝试对出现BKVJb-症及BKV相关性肾病(BKVAN)受者进行临床干预，观察治疗前、后BKVDNA载量及相应的肾功能等指标的变化情况。5、应用Excel2007软件进行实验数据录入及表格绘制。应用SPSS统计软件(16．o版)统计学分析，符合正态分布的数据应用平均值4-标准差表示，并应用随机分组凇验、方

7、差分析进行统计学分析，不符合正态分布的数据应用平均值，最小值和最大值表示，并应用秩和检验进行统计学分析。应用ROC曲线下面积对比分析BK病毒尿症和BK病毒血症"澳,]BKVAN进展的价值，应用相关分析和lo舀stic回归分析BK病毒感染的危险因素。应用乒印hpad(5．o版)军医进修学院硕士学位论文软件进行绘图制作。结果：1、研发的BKV试剂盒检测阳性结果的范围为1．0x103copies／ml到1．0x1010copies／ml。不与包括乙肝病毒(HBV)，丙肝病毒(HCV)，

8、EB病毒(EBV)，人巨细胞病毒(HCMV)，人类乳头状瘤病毒B19(H

9、PV’B19)和Jc病毒(JCV)等其它病毒发生交叉反应。标本检测时间一般为1．5至2小时(与样本量有关)。2、经过15个月定时监测116例肾移植受者的结果显示尿沉渣Decoy细胞阳性(Median7个／10HPF，[1-48个／10HPF])，BK病毒尿症(Median2．63x105copies／ml,[1．78×103．8．54x109copies／m1])，BK病毒血症(Mcdiall2．70x104copies／ml，[1．95x103．6．31x106copies／m1])的发生率分别为53．46％，24．17％和20．72％，活检穿刺病理

10、学诊断BKVAN受者共4例，发病率为3．45％。移植术后3个月左右是Decoy细胞阳性、BK病