·技术方法·实时荧光定量pcr检测肾移植患者术后bk病

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1、第二军医大学学报·６７２·２００６Ｊｕｎ；２７（６）ＡｃａｄＪＳｅｃＭｉｌＭｅｄＵｎｉｖ·技术方法·实时荧光定量ＰＣＲ检测肾移植患者术后ＢＫ病毒感染１１２１２陆明，朱有华，王皓，韩澍，冀俊峰（１．第二军医大学长征医院解放军器官移植研究所，上海２００００３；２．长征医院实验诊断科）［摘要］目的：建立肾移植术后患者尿液和外周血ＢＫ病毒（ＢＫＶ）感染负荷的实时荧光定量ＰＣＲ检测方法，并初步探讨其临床应用价值。方法：构建含有ＢＫＶＶＰ１蛋白保守区核苷酸序列片段的质粒作为外参照品，采用ＴａｑＭａｎ荧光探针检测技术，建立定量检测ＢＫＶＤＮＡ方法；并对１１２例肾移植术后患者，

2、４０例正常体检者的尿液和外周血标本ＢＫＶ含量进行检测。结果：本研究建立的ＢＫＶ实时荧光定量ＰＣＲ检测方法灵敏度、特异度及重复性较好，定量ＰＣＲ方法最低检测下限为８×１０２ｃｏｐｙ／ｍｌ，测量批内差异为０．５４％～３．７８％，批间差异为０．６２％～４．５８％。１１２例肾移植术后患者尿液和外周血ＢＫＶＤＮＡ的检测阳性率分别为２７．７％和１１．６％，ＢＫＶＤＮＡ阳性者尿液和外周血ＢＫＶ中位数水平分别为８．２×１０４３ｃｏｐｙ／ｍｌ和２．４×１０ｃｏｐｙ／ｍｌ。４０例正常人ＢＫＶ尿液和外周血阳性率为２．５％和０％；与正常体检者相比，肾移植术后患者尿液及外周血ＢＫＶＤＮＡ阳

3、性率及水平明显升高（Ｐ＜０．０１）。尿液ＢＫＶ阳性率较外周血明显升高（Ｐ＝０．０２），但尿液和外周血中ＢＫＶ含量无明显相关性。结论：实时荧光定量ＰＣＲ检测肾移植患者术后ＢＫＶ感染方法简便、可靠、准确，为进一步研究ＢＫＶ感染与肾移植术后移植物丢失的关系奠定了基础。［关键词］ＢＫ病毒；实时荧光定量ＰＣＲ；肾移植［中图分类号］Ｒ６９９．２［文献标识码］Ａ［文章编号］０２５８８７９Ｘ（２００６）０６０６７２０４ＡｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＢＫｖｉｒｕｓｉｎｒｅｎａｌｔｒａｎｓ

4、ｐｌａｎｔｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ１，ＺＨＵＹｏｕｈｕａ１，ＷＡＮＧＨａｏ２，ＨＡＮＳｈｕ１，ＪＩＪｕｎｆｅｎｇ２（１．ＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰＬＡ，ＣｈａｎｇｚｈｅｎｇＬＵＭｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００００３，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＤｉａｇｎｏｓｉｓ，ＣｈａｎｇｚｈｅｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ）［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉ

5、ｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅＢＫｖｉｒｕｓ（ＢＫＶ）ｌｅｖｅｌｉｎｒｅｎａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ，ａｎｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＰｌａｓｍｉｄｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐａｒｔｏｆＢＫＶＶＰ１ｇｅｎｅｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｒｅｇｉｏｎｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｓｅｘｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｓ，ａｎｄａＴａｑＭａｎｐｒｏｂｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏ

6、ｎｏｆＢＫＶ．Ｕｒｉｎｅａｎｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ（ＰＢ）ｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍ１１２ｒｅｎａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓｗｅｒｅａｓｓａｙｅｄｆｏｒＢＫｖｉｒｕｓｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｏｓｅｏｆ４０ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｓｓａｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｈａｄｇｏｏｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅｍｉｎ

7、ｉｍａｌｄｅｔｅｃｔａｂｌｅｌｅｖｅｌ２ｗａｓ８×１０ｃｏｐｙ／ｍｌ，ｉｎｔｒｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｖａｒｉａｔｉｏｎｗａｓ０．５４％３．７８％，ａｎｄｉｎｔｒａｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｖａｒｉａｔｉｏｎｗａｓ０．６２％４．５８％．ＢＫＶｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ２７．７％ｕｒｉｎｅｓａｍｐｌｅｓａｎｄ１１．６％ＰＢｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓ．ＴｈｅｍｅｄｉａｎｌｅｖｅｌｏｆＢＫＶｉｎｕｒｉｎｅａｎｄＰＢｗｅｒｅ４３８．２×１０ｃｏｐｙ／ｍｌａｎｄ２．４×１０ｃｏｐｙ／ｍｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＢＫＶｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆ４０ｈｅａｌｔ

8、ｈｙｐｏｐ