肾移植术后受者体内微嵌合状态的研究论文

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1、肾移植术后受者体内微嵌合状态的研究论文【摘要】目的:探讨肾移植术后受者体内微嵌合状态与移植肾功能、排斥反应之间的关系。方法:采用对人类性别决定基因SRY扩增的巢式PCR方法，对接受79例男性供肾的女性肾移植患者外周血的微嵌合进行检测分析。结果:总的微嵌合发生率为55.70%(44/79)，其中移植后6个月内微嵌合的发生率为35.71%，6～18个月内发生率为46.67%，18个月以上发生率为71.43%。10例患者术后14d至6个月连续观察发现微嵌合的出现呈波纹式动态变化。嵌合阳性患者的排斥反应发生次数明显

2、少于嵌合阴性患者(P0.05)，但二者血肌酐值差别无显著性(P0.05)。结论:微嵌合阳性患者的排斥反应发生率明显降低。【关键词】肾移植微嵌合嵌合状态移植物排斥Abstract:Objective:Toinvestigatetherelationshipamongmicrochimerism,allograftfunctionandtheincidenceofrejectionafterrenaltransplantation.Methods:Peripheralbloodmicrochimerismale

3、recipientsbymeansofnestPCRersfromasexdeterminingregionofYchromosome.Results:Microchimerismicrochimerismonth,46.67%in6～18monthand71.43%beyondmonth18,respectively.Theoccurrenceofmicrochimerismin10recipients,periodicallymonitoredfromday14tomonth6,dynamicallyf

4、luctuatedinicrochimerismrecipientsicrochimerismisfrequentlydetectedinrecipientsurvivalandassociatedicrochimerism微嵌合现象作为当前免疫抑制下器官移植出现的新特点已得到证实，但有关微嵌合与免疫耐受状态间的关系看法不一。本研究旨在用对人类性别决定基因SRY扩增的巢式PCR方法，分析微嵌合的发生、发展.freell，立即提取DNA，保存于-20℃。其中10例患者为连续观察，在术后第14天开始连续采集标本

5、至第6个月。对所有患者采集标本的同时检测血肌酐值。1.3外周血DNA提取患者DNA提取采用盐析法（DNAIsolationKit，Gentra公司生产）。取300μl全血加入0.98%的NH4Cl1ml破红细胞膜10min，离心后取白细胞加入300μl细胞裂解液，充分混匀后放置10min；加入蛋白质沉淀液150μl充分混匀,离心5min(12000r/min)；取上清液加入异丙醇300μl沉淀DNA；75%乙醇洗3次，待乙醇蒸发后加入溶解液100μl，-20℃保存。1.4实验观察根据人的性别决定基因SRY序

6、列，设计引物对（S1：5'cagtaaaggccaacgtccagg3'，S2：5'cgcattcatcgtgtggtctc3'，A：5'tgttgtccagttgcacttcg3'），引物由上海生工公司合成。患者DNA提取采用盐析法（DNAIsolationKit，Gentra公司）。DNA经S1/A引物第一次扩增后，取2μl产物用S2/A进行第二次扩增。二次扩增产物经1%琼脂糖电泳，紫外线仪下观察记录结果。循环条件为：94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，总共25个循环，最后72℃延伸

7、10min。扩增仪选用PE-9600，总反应体系为20μl（PCRCoreSystems，Promega）。1.5统计学处理方法不同组间微嵌合发生率比较用Fisher精确概率法检验，微嵌合阳性与阴性患者肌酐值的比较采用t检验。2结果2.1SRY基因PCR扩增结果正常男性DNA扩增产生290bpY染色体特异片段，而正常女性DNA扩增为阴性，接受男性供肾的女性受者DNA扩增产生阳性条带，即表明发生了嵌合(见图1)。本组79例患者检测结果显示：总的微嵌合发生率为55.70%(44/79)，其中6个月内微嵌合的发生

8、率为35.71%（5/14），6～18个月内发生率为46.67%（14/30），18个月以上发生率为71.43%（25/35）。三组间比较，差别有显著性(P0.05)。2.210例患者术后14d至6个月连续观察结果微嵌合的出现呈非均一性，以波纹式动态变化为主：术后2ol/L，阴性患者为(110.50±33.24)μmol/L，两组比较差异无显著性(P0.05)。2.4嵌合患者与排斥反应次数的关系未发生排斥者：阳性