6-姜酚对过氧化氢致huvec损伤的保护作用及机制探讨

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1、万方数据中图分类号R972．6密级6．姜酚对过氧化氢致HUVEC损伤的保护作用及机制探讨Theprotectiveeffectsandpossiblemechanismsof6一gingerolagainsthydrogenperoxideinducedinjuryinHUVEC计：学位论文：76页表格：1个插’图：24幅王少鹏指导教师：杨延宗教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：内科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二。一四年十月答辩委员会主席：万方数据独创性声明㈣洲洲I㈣删㈣㈣lY2906384本人郑重声明：所呈交的学位

2、论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科jk学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：至，2翟筵签字日期：觯年—立月L日万方数据关于学位论文使用授权的说明本学位论文作宅二完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部f：或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将

3、本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)：1．保密口，在年解密后适用本授权书。2．彳i保密瓯／作者签名：三导师签名：≥姚日物I中年I扩J日日期汤I々912．_,qJ日万方数据目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10(一)

4、前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第一部分6．姜酚通过白噬对过氧化氢致HUVEC凋亡的保护作用(--)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。121．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．121．1主要药品与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．2主要仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131-3实验对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．132．1MTT实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．132．2Hoechst33342荧光染色方法观察HUVEC凋亡⋯⋯⋯．．142．3AnnexinV．FITC／PI双染流式细胞仪检测HUVEC凋亡．．142．4荧光显微镜观察HUVEC自噬体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一142．5蛋白质印迹法(WesternBlot)检测自噬相关蛋白⋯⋯⋯152．6HUVEC内线粒体膜电位的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．7HUVEC内ROS测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．16万方数据2．8HUVEC内GSH含量的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．162．9激光共聚焦显微镜观察HUVEC溶酶体稳定

6、性⋯⋯⋯．．172．10统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯171．6一姜酚，H202及自噬诱导剂和抑制剂对HUVEC存活率的影⋯171．16．姜酚及H202对HUVEC存活率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171．23-MA对HUVEC存活率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．3雷帕霉素对HUVEC存活率的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．Hoechst33342荧光染色方法观察凋亡的结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203．AnnexinV．FITC／PI双染流式细胞仪检测HUVEC的凋亡⋯⋯2

7、14．荧光显微镜观察HUVEC的自噬体结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．225．6一姜酚及H202对HUVEC蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯245．16．姜酚及H202对HUVEC内LC3．II蛋白表达的影响⋯⋯245．26．姜酚对HUVEC内Bcl．2，Beclin-1蛋白表达的影响⋯．．245．36一姜酚对HUVEC内roTOR，p-mTOR蛋白表达的影响⋯266．激光共聚焦显微镜观察HUVEC溶酶体稳定性⋯⋯⋯⋯⋯⋯．277．6一姜酚及H202对HUVEC内线粒体膜电位水平的影响⋯⋯⋯288．6．姜酚及H202对HUVECp,jROS水平的影

8、响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯289．6．姜酚及H202对HUVEC内GSH水平的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3l(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯