gnrha对化疗致卵巢损伤保护机制的探讨

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1、分类号UDC密级编号硕士学位论文GnRHa对化疗致卵巢损伤保护机制的探讨DiscussionontheMechanismofGnRHainProtectingfromChemotherapyInducedOvarianDamage学位申请人：王盈指导教师：田晓予教授一级学科：临床医学二级学科：妇产科学学位类别：医学硕士2015年05月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，

2、也不包含为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要一、氟尿嘧啶诱导大鼠卵巢损伤模型的建立目的：建立氟尿嘧啶诱导的大鼠卵巢损伤模型。方法：选取具有正常动情周期的8~10周龄雌性SD大鼠20只，随机均分为-1-4组：生理盐水对照组、5-FU低、中、高剂量组：分别接受生理盐水1ml·kg·d1-1-1-1-1-1-1和5-FU5mg·kg·d、10mg·kg·d、20mg·kg·d

3、腹腔注射，连续14天。每天进行大鼠阴道涂片监测动情周期，并于给药前、停药时、停药2周剪尾取血1ml检测血清AMH、FSH和E2水平，同时记录大鼠一般情况。于停药时和停药2周分批处死大鼠，取其双侧卵巢组织称取湿重，进行石蜡包埋，组织切片后进行HE染色，光学显微镜下统计各级卵泡数目。结果：5-FU处理组大鼠体重均有不同程度下降，饮食量也明显减少，低、中、高剂量组平均饮食量由正常18~20g/只分别降为15g/只、12g/只、9g/只。饮水量及小便量增加。用药后生理盐水组大鼠有正常动情周期(4~5天)，低剂

4、量组虽有动情周期，但由4~5天延长至7~8天。中剂量组给药第9天，高剂量组给药第5天出现动情周期紊乱：动情间期延长，动情期缩短，直至不出现动情期。给药前各组血清各激素水平均无差异(P>0.05)。停药时，较生理盐水组相比，低、中、高剂量组血清各项性激素均出现不同程度改变，FSH升高明显(P<0.05)，E2降低明显(P<0.05)，AMH降低明显(P<0.05)，生长卵泡和原始卵泡数目均较生理盐水组明显减少(P<0.05)，除低剂量组卵巢湿重减轻较明显外(P<0.05)，中、高剂量组变化并不明显(P>

5、0.05)。停药2周，较生理盐水组相比，除低剂量组FSH降至正常外，其余组各项性激素改变仍明显(P<0.05)，生长卵泡和原始卵泡数目均较生理盐水组明显减少(P<0.05)，中、高剂量组卵巢湿重明显减轻(P<0.05)。停药2周和停药时相比，各组各项激素变化以及原始卵泡和生长卵泡变化均不明显，差异无统计学意义(P>0.05)，但高剂量组卵巢湿重明显减轻(P<0.05)。结论：5-FU能够引起血清E2、FSH和AMH水平的改变，导致大鼠正常动情周期紊乱甚至消失。故可以应用5-FU20mg/kg建立卵巢损

6、伤的大鼠模型。二、GnRHa对化疗致卵巢损伤的保护作用目的：探讨GnRHa对5-FU诱导大鼠卵巢损伤的保护机制。方法：将具有正常动情周期的雌性SD大鼠随机分为生理盐水对照组(10只)、5-FU组(15只)、曲普瑞林+5-FU组(10只)、曲普瑞林+生理盐水组(10只)四组(分别I摘要-1标记为A、B、C、D)。A组：给予1ml·kg生理盐水腹腔注射，间隔1天，一共14-1次。B组：5-FU按20mg·kg剂量腹腔注射，间隔1天给药，一共14次。C组：分-1别于实验前14天及给予5-FU后14天，按0.

7、1mg·kg剂量曲普瑞林，深部肌肉注射，5-FU的用法及用量同B组。D组：曲普瑞林用法及用量同C组，生理盐水用法及用量同A组。实验前、给药第14天、28天和停药1周、2周时留取各组血标本，用于测定血清中的AMH、FSH和E2水平，并在停药1周和2周时动情间期分批处死大鼠，取两侧卵巢，称取湿重。一侧卵巢组织用10%中性福尔马林溶液固定，进行石蜡包埋。连续5μm切片后HE染色，光镜观察并计数各期卵泡数目及免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白表达情况。另一侧卵巢组织用于提取蛋白，进行Western-Blot实

8、验。试验期间每天进行阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期。结果：①大鼠动情周期变化：A组均为正常动情周期。B组给予5-FU后经过1次完整动情周期后出现动情周期紊乱，继续给药后甚至不出现动情期，仅有动情间期。停药1周时均未恢复正常动情周期；停药2周时，21.6%恢复正常动情周期（3/14）。C组和D组在应用曲普瑞林后经过1次完整动情周期后不再出现动情期。C组停药第3天先出现动情周期延长至10天，随后逐渐恢复正常动情周期，D组停药第4~5天恢复正常动情周期。②血