姜黄素对小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

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1、湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书丙使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阕；学校可以公布学位论文的全部或

2、部份内容，可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密论文在解密后遵守此规定)黼槲：蛔狲名：泸哗奄垆月夕日蝴名，糕7文歹论}倒牌荆奶目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯I主要英文缩写词索引⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．VII前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1材料和方法⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31对象⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．1实验动物及分组：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．2主要药品及试剂：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．3主要仪器：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．52实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．1观察动情周期⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．2给药方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62．3标本收集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．72．4观察指标及检查方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯73统计分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131小鼠一般情况观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯132小鼠卵巢肉眼观、卵巢指数及卵巢组织脏染色结果⋯⋯⋯．133卵巢组织中氧化标志物测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．144P66Shc蛋白表达测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯155细胞增殖测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．15讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．171氧化应激与卵巢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．172动物模型的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．183中药成分姜黄素与氧化损伤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．204氧化标志物与卵巢氧化应激⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26思考与展望

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35攻读学位期间发表的学术论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．43附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46摘要目的建立卵巢氧化应激的小鼠模型并对其进行评估，观察姜黄素干预小鼠卵巢氧化应激后小鼠卵巢组织中氧化标志物含量、组织形态学变化、P66Shc蛋白的表达以及细胞增殖的情况。研究方法用阴道脱落细胞涂片法观察到连续2个

6、动情周期规律的、未交配过的、性成熟的雌性昆明小鼠作为研究对象，于给药前一天各小鼠统一肌肉注射0．1mg／kg苯甲酸雌二醇，统一动情周期，将小鼠随机分成正常对照组，Omg／kgCur组，lOOmg／kgCur组，150mg／kgCur组，200mg／kgCur组，每组15只，除正常对照组用蒸馏水腹腔注射外，各组均用8mg／kg亚砷酸钠溶液腹腔注射(隔日一次)造模，同时正常对照组、Omg／kgCur组给予O．5％羧甲基纤维素钠灌胃，姜黄素各组分别给予不同剂量姜黄素(100mg／kg、150mg／kg、200mg／kg)每天定时给

7、药，连续给药21天。于第22天用颈椎脱臼法处死小鼠，处死前1小时腹腔注射BrdU，采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测卵巢组织匀浆中活性氧(Reactiveoxygenspecies，ROS)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase，GSH-Px)含量，蛋白印迹(Westernblotting)法评估姜黄素对卵巢P66Shc蛋白表达的影响，免疫组化(Immunohistochemica

8、l)法观察姜黄素对卵巢组织细胞增殖的影响。结果1．在实验期间，各小鼠饮水、饮食正常，均未出现反应淡漠、异常兴奋、少食少动、皮毛干枯等异常表现。各小鼠体重均呈增长趋势，体重增长百分比依次为正常对照组(16．52±9．62)，100mg／kgCur组(16．29±4．86)，150mg／kgC