黄芪多糖对辐射致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用与其机制探讨

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1、黄芪多糖对辐射致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制探讨中文摘要目的：探讨黄芪多糖（Astragaluspolysaccharide，APS）对辐射所致心肌细胞损伤的可能保护作用及其机制。方法：原代提取Wistar乳鼠心肌细胞，密闭培养于37℃、5%CO2培养箱中，取对数生长期的心肌细胞，用X线照射心肌细胞建立辐射损伤模型，用不同浓度的APS进行干预。实验分五组：正常对照组；辐射损伤模型组（照射剂量为6Gy）；黄芪多糖低剂量干预组（终浓度为0.025mg/mL）；黄芪多糖中剂量干预组（终浓度为0.05mg/mL）；黄芪多糖高剂量干预组（

2、终浓度为0.1mg/mL）。MTT法检测各组心肌细胞生长抑制率；流式细胞仪(FlowCytometry，FCM)检测各组心肌细胞的细胞周期和细胞凋亡；激光共聚焦（laserconfocalmicroscope，LSCM）检测各组心肌细胞线粒体功能；DCFH-DA荧光探针检测各组心肌细胞ROS表达水平；蛋白印迹法检测各组心肌细胞内CytC、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达。结果：正常心肌细胞呈圆形、梭形及多边形等多种形态，细胞之间通过伪足相互交织成网，呈簇状生长。辐射损伤后心肌细胞部分变圆、漂浮、开始出现凋亡。与正常

3、对照组相比，辐射损伤组心肌细胞生长抑制率明显升高、细胞周期延长、凋亡增加、线粒体功能异常、线粒体膜电位（Mitochondrialmembranepotential，ΔΨm）降低、ROS表达及CytC，Caspase-3，Caspase-9蛋白的相对表达量明显升高，差异具有显著性（p＜0.05）。与辐射损伤组相比，黄芪多糖（APS）各干预组心肌细胞生长抑制率均不同程度下降、细胞周期均不同程度缩短、凋亡减少、线粒体功能有所改善，线粒体膜电位（ΔΨm）有所升高、ROS表达及CytC，Caspase-3，Caspase-9蛋白的相对表达量均

4、不同程度降低（p＜0.05）。结论：1．黄芪多糖（APS）可以通过清除ROS、缩短细胞周期、促进心肌细胞增殖、稳定线粒体膜电位、降低CytC，caspase-3，caspase-9蛋白的表达、降低凋亡比率来达到对辐射致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。2．黄芪多糖可以通过扶正固本、益气养阴、活血化瘀的功效减轻放射线的损伤。关键词：黄芪多糖；辐射；心肌细胞；线粒体1万方数据黄芪多糖对辐射致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制探讨AbstractObjective:ToinvestigatetheeffectofAPSonantiradiatio

5、ndamageincardiacmyocytesanditsmechanism.Methods:Primaryextractiontechniquessuccessfullyculturedmyocardialcellsinvitro,X–rayestablishmentofcardiacmyocytedamagemodelandtheinterventionbydifferentconcentrationofAPS.Theexperimentwasdividedintothefollowingfivegroups:Normalcon

6、trolgroup;Radiationdamagemodelgroup(6Gy);Low-doseAPSintervenetiongroup(0.025mg/mL);Medium-doseAPSinterventiongroup(0.05mg/mL);High–doseAPSintervenetiongroup(0.1mg/mL).ThegrowthinhibitionrateofmyocardialcellsofeverygroupswasassessedusingMTTassay;Thecellcycleandapoptosiso

7、feverygroupswasdetectedbyflowcytometry;Themitochondrialfunctionofeverygroupswasevaluatedbylaserconfocalmicroscope;ThelevelsofROSofeverygroupswasmeasuredbyfluorescentprobeDCFH-DA;TheproteinexpressionofCytC,caspases-3,caspases-9inthemyocardialcellsofeverygroupsweredetermi

8、nedwithwesternblotmethod.Result:Thecardiacmyocyteofnormallyculturedwereroundshape,butafterradiationdamage,they