锂剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用与其机制

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1、摘要protein-2，MAP2)，激活的半胱天冬酶3(activatedcaSpaSe-3)，凋亡诱导因子(apoptosisinducingfactor．AIF)，细胞色素C(cytochromec)，胞衬蛋白降解产物(fodrinbreakdownproduct,FBDP)以及微管相关蛋白2轻链3(microtubularassociatedprotein一2，lightchain-3，LC3)的免疫组化染色，或者直接断头处死后快速分离左右大脑皮层和纹状体，加入冰冷的匀浆缓冲液手工匀浆，采用密度梯度离心分离细胞浆，细胞核以及线粒体成分，进行酶活性测定或者蛋白印迹检测

2、。结果在缺氧缺血后72小时对脑损伤的程度进行评估，通过MAP2免疫组化染色并计算脑梗塞体积，脑萎缩体积以及脑各部位的病理积分进行综合评估。结果发现，锂剂治疗组(n．=28)的脑梗塞体积为13．8±3．3mm3，较对照组(n．28)的脑梗塞体积24．7±2．9mm3减少44．1％(P<0．05)，而脑萎缩的体积在锂剂治疗组为24．8±3．3mm3，较对照组的脑萎缩体积42．4±2．4mm3减少41．5％(P<0．001)，并且锂剂治疗组在多个区域，包括大脑皮质(P<0．05)，海马(P<0．01)，丘脑(P<0．001)和纹状体(P<0．01)的脑损伤程度均较对照组明显减轻

3、。磷酸化的糖原合成酶激酶．3B(GSK-313)是糖原合成酶激酶．313的无活性形式，活化的糖原合成酶激酶．3B能够促进细胞的死亡。在锂剂治疗后6小时，损伤侧大脑皮层磷酸化的糖原合成酶激酶．313的含量明显高于对照组损伤侧的含量(P<0．05)。细胞外信号调节激酶(Extracellularsignal-regulatedkinase$，ERK)具有促进细胞存活的作用，磷酸化的ERK是其活性形式，锂剂治疗后6小时损伤侧磷酸化ERK的含量明显高于对照组损伤侧的含量(P

4、的底物，前者能使胞衬蛋白降解为150kDa的降解产物(FBDP)，后者能使胞衬蛋白降解为120kDa的降解产物，锂剂治疗组胞衬蛋白的降解明显减少，同时FBDP免疫组化染色的阳性细胞的数量也明显减少，提示锂剂能够抑制lI摘要calpajn的激活。casp嬲e．3阳性细胞数量及caSpaSe．3的活性测定结果显示，在锂剂治疗后6小时较对照组低，但无统计学差别。在锂剂治疗后24dx时活性较对照组明显降低(P

5、阳性细胞的数量在锂剂治疗后24dx时的海马区域下降最明显(P<0．05)。细胞色素C存在于正常细胞的线粒体膜腔隙中，在损伤因素作用下由线粒体释放到胞浆，通过激活caSpase．3引起细胞死亡，蛋白印迹定量的结果显示线粒体中细胞色素C的释放随缺氧后恢复时间的延长而增加，但是锂剂治疗能降低细胞色素C的释放，尤其在缺氧缺血后24小时最明显(P<0．05)，细胞色素C免疫组化染色的阳性细胞数在锂剂治疗后24小时明显低于对照组(P<0．05)。AIF存在正常细胞的线粒体膜腔隙中，在损伤因素作用下由线粒体释放到胞浆并跨膜转移到细胞核导致DNA断裂，蛋白印迹定量的结果显示线粒体中AIF

6、的释放随缺氧后恢复时间的延长而增加，但是锂剂治疗能降低AⅢ的释放，尤其在缺氧缺血后24小时最明显(P

7、噬III摘要关键词：锂剂脑缺血细胞死亡凋亡自吞噬神经保护IVAbstractBackgroundand0bjectivePerinatalasphyxia-inducedbraininjuryisoneofthemostcommoncausesofmorbidityandmortalityintermandpretermneonates．Thetreatmenthasbeenpurelysupportiveincludingstabilizingcardio-respiratoryfunctionsandtreatingcon