附子多糖对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护及其线粒体机制探讨

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1、广东药学院硕士研究生学位论文题目：附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护及其线粒体机制探讨姓名：纪超学号：2110943007院系：基础学院专业：病原生物学导师姓名：刘颖副教授二○一二年五月分类号：___________密级:__________UDC:___________附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护及其线粒体机制探讨MechanismofFuzipolysaccharideprotectsneonatalratcardiomyocyteswithhypoxia/reoxygenation:preliminarystudyofmitochondria姓名：纪超

2、学号：2110943007院系：基础学院专业：病原生物学研究方向：心血管疾病的防治导师姓名：刘颖副教授论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：广东药学院二○一二年五月广东药学院学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：＿＿＿＿＿日期：年月日学位论文使用授权的声明本人完全了解广东药

3、学院有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：＿＿＿＿＿论文导师签名：＿＿＿＿＿日期：年月日广东药学院硕士研究生学位论文附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护及其线粒体机制探讨硕士研究生：纪超专业：病原生物学导师：刘颖副教授摘要研究背景：心肌缺血再灌注损伤(myocardialischemiareperfusioninjury,MIRI)是现在临床上常见的一种

4、病理生理现象，它是由缺血的心肌在恢复血流后引起的，表现为组织损伤反而更加重，甚至产生不可逆性的损伤。MIRI限制了对缺血心肌的许多重要治疗手段如冠状动脉搭桥术、急性心肌梗死溶栓疗法、经皮腔内冠脉血管成形术等的开展，已成为临床上亟待解决的问题。大量资料表明，细胞凋亡是MIRI后心肌细胞死亡的主要形式。然而，关于MIRI导致心肌细胞凋亡的研究仍大部分集中在凋亡现象的发现及某些尝试性的干预措施，对于凋亡的分子机制尚不十分清楚。随着研究的深入，线粒体在MIRI导致心肌细胞凋亡过程中的调控作用逐渐被揭示，这被认为是凋亡信号转导研究的重大进展之一。近年的研究发现，当细胞接受凋亡刺激信

5、号后，能够引起第二个线粒体来源的胱氨酸酶激活剂/低等电点IAP直接结合蛋白(secondmitochondria-derivedactivatorofcaspase/directIAP-bindingproteinwithlowPI,Smac/Diablo)从线粒体释放入胞浆，发挥促进细胞凋亡的作用。中药附子作为我国传统名方如四逆汤、参附汤的君药，在对MIRI的研究中表现出良好的抗心肌细胞凋亡[1-6]作用。如今，中药单体的研究成为热点，附子多糖(fuzipolysaccharide,FPS)作为从附子中提取出的区别于乌头碱的另一类单体，因其具有降糖调脂、增强免疫力和协助

6、抗肿瘤等药理活性，正逐渐受到人们的关注，然而，关于其对MIRI的心肌保护作用及机制的研究却未见报道。I广东药学院硕士研究生学位论文研究目的：本研究通过建立新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤模型来模拟体内MIRI，通过给予FPS来观察其对心肌的保护作用，并以细胞凋亡的线粒体信号转导通路作为着眼点，进一步探讨FPS在MIRI中的保护机制，为FPS的药物开发和利用提供坚实的理论基础和实验室依据。研究方法：原代体外分离培养SD大鼠乳鼠的心肌细胞，随机分为正常对照（Control）组、缺氧/复氧（H/R）组（缺氧3h后复氧6h）和附

7、子多糖（FPS）组（预先以不同浓度0.1mg/mL、1mg/mL、10mg/mL、20mg/mL的FPS干预培养24h，然后与H/R组作相同处理），处理结束后进行：1心肌细胞形态学观察:用倒置显微镜观察各组心肌细胞形态的改变，分析缺氧/复氧和不同浓度附子多糖对心肌细胞形态学的影响。2心肌细胞活力测定:用四唑盐MTT比色法检测各组心肌细胞的存活率，判断附子多糖对缺氧/复氧心肌细胞的保护。3心肌细胞LDH的漏出量和CK活力的检测:通过测定各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase,LDH）的活性以及细