丹参酮ⅱa对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及机制研究

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1、丹参酮ⅡA对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用及机制研究作者：杨萍，李杰，周凤华，李丽君，贾钰华【摘要】目的观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞，以200μmol/L过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激模型，分别以丹参酮ⅡA高、中、低剂量在造模前干预24h。采用MTT法检测细胞活力，流式细胞仪AnnexinV-PI双染法检测细胞凋亡率，检测心肌细胞总抗氧化能力（T-AOC）、LDH活性、MDA含量、SOD活力、GSH-Px活力、CAT活力。结果模型组心肌细胞经200μmol/L过氧化氢作用2

2、h后，细胞活力显著降低，凋亡率显著增高。与模型组比较，丹参酮ⅡA显著增加心肌细胞活力，降低细胞凋亡率。过氧化氢可导致心肌细胞LDH活性及MDA含量显著增加，并使总抗氧化能力（T-AOC）、SOD活力、GSH-Px活力、CAT活力显著降低，丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低LDH活性及MDA含量，增加总抗氧化能力（T-AOC）、SOD活力、GSH-Px活力、CAT活力。结论丹参酮ⅡA可以抑制过氧化氢诱导的心肌细胞损伤，这可能与其增强细胞抗氧化酶活力，降低脂质过氧化反应有关。【关键词】丹参酮ⅡA；心肌细胞；氧化应激ChinaAbstract：ObjectiveTo

3、studytheprotectiveeffectandmechanismofTanshinoneⅡAonmyocardialdamageinducedbyhydrogenperoxide.MethodsPrimaryculturedneonateratmyocardialcellediumol/Lhydrogenperoxide,andthemediumentedinedbyMTTmethod.AnnexinV/PIbivariatedyEingodelgroup,cellviabilitydecreasedsignificantlyandapoptosis

4、raterosesignificantlyparedalgroup.paredodelgroup,TanshinoneⅡAincreasedcellviabilityanddecreasedapoptosisrateinadose-dependentmanner.paredalgroup,LDHandMDAincreasedremarkably,andT-AOC,SOD,GSH-Px,CATarkablyinmodelgroup.paredodelgroup,TanshinoneⅡAdecreasedLDHandMDAsignificantly,andinc

5、reasedT-AOC,SOD,GSH-Px,CATsignificantlyinadose-dependentmanner.ConclusionTanshinoneⅡAcanreducemyocardialdamageinducedbyhydrogenperoxide,themechanismmayberelatedentantioxidaseactivity,anddecreaseoflipidperoxidation.　　Keyia/reperfusion,I/R)损伤所带来的问题日益明显［1］。许多实验研究已证明，在心肌损伤区有大量自由基产生，自由基

6、产生的氧化损伤是心肌损伤的重要因素，而应用自由基清除剂可以减轻组织细胞的损伤［2］。丹参是我国的传统中药，被广泛用于冠心病的治疗。丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡ,TSN）是丹参最重要的生物活性部分［3］。本实验以体外培养的乳鼠心肌细胞为基础，以H2O2诱导细胞损伤为模型，旨在研究丹参酮ⅡA在氧化应激条件下对心肌细胞的保护作用，探讨其可能的作用机制，阐释丹参治疗心肌缺血性疾病的机理。　　1材料　　1.1动物出生1～3d雄性EM培养基购于Gibico公司；丹参酮ⅡA购于中国药品生物制品检定所（批号110766-200417）；乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒、

7、丙二醛(MDA)测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒、总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。　　2方法　　2.1分组原代乳鼠心肌细胞经分离、纯化后进行实验分组，分为以下几组：①正常组：培养的正常心肌细胞培养；②模型组：心肌细胞培养液中添加200μmol/LH2O2作用2h；③丹参酮ⅡA高剂量组：心肌细胞用丹参酮ⅡA1×10-4mol/L培养24h后添加200μmol/LH2O2继

8、续作用2h。④丹参酮ⅡA中剂量组：心肌细胞用丹参酮Ⅱ