苹果多酚对吸烟诱导的肺损伤的保护作用及机制

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1、浙江大学硕士学位论文苹果多酚对吸烟诱导的肺损伤的保护作用及机制姓名：包梦静申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：谢强敏20120225浙江大学硕士学位论文摘要苹果多酚对吸烟诱导的肺损伤的保护作用及机制浙江大学医学院药理学系硕士研究生包梦静导师谢强敏教授摘要实验目的：慢性阻塞性肺部疾病(chronicobstmctivepulmonarydiseases，CoPD)，是一种不完全可逆的气流受限特征的可以预防和治疗的疾病。香烟烟雾(CS)中含有大量的氧基自由基离子(Ros)，如02．、·oH、H202等，吸烟可以导致肺上皮细胞的功能障碍，而导致免疫反应失衡，释放一系列前

2、炎因子、细胞粘附因子、活性氧代谢物，最终造成了肺组织的损伤。TNF．Q是其中的主要的前炎因子之一，cs中的ROS激活TNF．Q转换酶，也可激活有丝分裂原活化蛋白激酶信号传导通路(MAPK)在内的各种细胞内信号通路的效应器。苹果多酚(APP)在体外试验中已被证实了具有很强的抗氧化作用。本实验以香烟烟雾(Cs)暴露的小鼠和香烟提取物(csE)刺激的人体气道上皮细胞NcI．H292为模型，研究了APP对香烟烟雾引起的肺损伤的作用，并探讨了其可能的作用机制．实验方法：以香烟烟雾暴露的小鼠为模型，将小鼠随机分为空白组，模型组，白藜芦醇阳性对照组(RES，30mg／l(g)。地塞

3、米松阳性对照组(DEx，lmg／l(g)，苹果多酚低、中、高剂量组(APP，30、100、300m眺g)．共7组，每组lo只．小鼠进行连续四天的烟雾暴露，暴露前后分别进行灌胃给药．最后一次给药完毕18小时后，取肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞计数，细胞分类计数以及超氧化物歧化酶(soD)活力的检测．取左上肺进行谷胱甘肽(GSH)水平检测，过氧化物n浙江大学硕士学位论文摘要髓化酶(MPo)活力检测，提取mRNA和蛋白进行相关炎症、凋亡和氧化因子的检测。取左下肺做组织切片，进行HE染色以及免疫组化检测。在体外试验中，我们以2．5％CSE刺激的NCI．H292细胞为模型，给

4、药组加入APP(1“∥m1)预处理，通过检测细胞活性，细胞内ROS、谷胱甘肽(GSH)水平，P38分裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)，外信号调节激酶l／2(ERKl／2)，c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化，以及肿瘤坏死因子(TNF．0【)的表达，探讨APP可能作用的信号通路。实验结果：在整体实验中，可以观察到(1)与空白组相比，小鼠在香烟暴露之后，白细胞总数，中性粒细胞和巨噬细胞数有明显得上升．而口服APP30、100、300m眺g均能有效地减少白细胞，中性粒细胞和巨噬细胞的增多，并呈现明显的量效关系。口服loom酢g的苹果多酚，其炎症细胞数已与阳性对照组相

5、当。在肺组织HE染色中，可以观察到香烟暴露小鼠的肺泡内炎症细胞(中性粒细胞和巨噬细胞数)浸润增多，而APP和DEx组的小鼠肺泡内中性粒细胞数目明显减少。(2)与空白组相比，小鼠在香烟暴露之后，IL．1D、TNF．Q、CXCL．1、McP．1mRNA表达均明显上升．而口服APP后小鼠IL．1p、TNF．a、CxcL．1、McP—l的表达呈剂量依赖性下降。在抑制IL—lp表达中，30m眺gAPP效果已与REs、DEx相当。而在抑制TNF-a表达中，30m眺gAPP与REs效果相当，100m眺gAPP和DEx效果相当。苹果多酚三个剂量对抑制cxCL-l，McP．1表达效果差

6、别不大，且与阳性对照组效果相当．(3)与空白组相比，小鼠经过香烟暴露之后Bcl-2mRNA表达下降，而Ba】‘、caspase-3、caspase一9、cyt．cmRNA表达均明显上升。而口服APP后小鼠Bax、caspase-3、caspase．9、C”．c表达呈剂量依赖性下降且效果强于阳性对照组．口服300mg／l(gAPP后，小鼠体内Bcl．2mRNA表达上升，lOOmg／l(gAPP效果与RES相当，300mg／l(gAPP效果与DEX相当，30m眺gAPP没有明显的作用．在对凋亡因子的蛋白表达检测中。与空白组相比，小鼠烟雾暴露之后Bcl-2蛋白表达下降而Ba

7、x、c嬲pase．3、caspase．9，Cyt．cmRNA表达均明显上升．而口服APP后小鼠Bax、caspase-3、caspase．9、c”．c表达呈剂量依赖性下降．Bcl．2表达呈剂量依赖性上升．效果基本强于阳性对照组．(4)香烟暴¨I浙江大学硕士学位论文摘要露小鼠体内SoD活性和GsH水平明显下降。其中300mg／l(gAPP组以及RES组小鼠的soD活性相应上升，30m眺gAPP组SoD活性上升不明显。而APP三个剂量和RES均能升高GSH水平。在小鼠肺组织匀浆MPO活性检测中，与空白组相比，香烟暴露小鼠肺组织MPo的活性明显上升，而AP