cd147与abcg2在银屑病表皮和hacat细胞中的表达及相互作用

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1、八年制博士学位论文CDl47与ABCG2在银屑病表皮和HaCaT细胞中的表达及相互作用TheExpressionandInteractionofCD147andABCG2inEpidermisofPsoriasisandHacatCells作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：陈晨皮肤病与性病学湘雅医院陈翔教授论文答辩日期型!圣：至：lj答辩委员会主席中南大学二零一二年五月一冷一一牛血月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果

2、，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说明。作者签名：毒鲻L日期：业年上月粤日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：埠蝎k一导师签名—阻日期：卫年上月{日八年制博士学位论文中文摘要摘要目的CDl47是一种属于免疫球蛋白超家族的细胞膜表面高糖基化蛋白，其在表皮中的表达对银

3、屑病的发生发展具有促进作用。ABCG2是ATP结合转运蛋白超家族成员之一，主要行使将多种化疗药物泵出细胞外的功能，进而降低细胞对药物的敏感性。近年已有文章报道ABCG2与角质形成细胞的增殖相关，但其在银屑病角质形成细胞中的分布及功能目前尚不清楚。本文旨在探讨CDl47与ABCG2在银屑病表皮和HaCaT细胞中的表达、分布及相互调控，为进一步揭示银屑病的致病机制提供理论依据。方法(1)免疫组化分析CDl47与ABCG2在银屑病皮损表皮中的表达及分布；(2)冰冻切片激光共聚焦方法分析CDl47与ABCG2在银屑病皮损表皮的位置关系；(3)构建稳定转染CDl47的HaCaT细

4、胞株(HaCaT-C)及米托葸醌(mitoxantrone，MX)诱导高表达ABCG2的HaCaT细胞株(HaCaT-A)，Westernblot方法鉴定稳定株的构建；(4)免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)检测CD147与ABCG2在HaCaT-A中是否形成复合物；(5)利用HEK293FT细胞共转染高表达ABCG2质粒及不同CDl47片段质粒，IP分析ABCG2与CDl47相互结合位点；(6)Westernblot检测MX诱导的ABCG2在HaCaT-C及对照I本研究得到国家自然科学基金(编号：81000690)资助八年制博士学位论文中文摘要组

5、HaCaT细胞株(HaCa■N)的表达差异；(7)采用Alarmblue染色方法分析HaCaT-C及HaCaT-N对MX的敏感性(IC50)；(8)Westernblot分析TNF．Q及对照组PBS诱导HaCaT细胞株中CDl47与ABCG2表达水平的差异。结果(1)银屑病皮损与正常皮肤相比，CDl47及ABCG2在银屑病角质形成细胞中的表达全层上调，并且主要表达在细胞膜；(2)激光共聚焦发现银屑病皮损角质形成细胞中CDl47与ABCG2存在共定位现象；(3)成功构建高表达CDl47的HaCaT-C及高表达ABCG2的HaCaT-A细胞株；(4)IP显示CDl47与AB

6、CG2在HaCaT-A细胞中以复合物形式存在；(5)成功建立共同转染ABCG2质粒及不同CDl47片段质粒的8组293FT细胞，IP揭示CDl47与ABCG2结合位点位于CDl47跨膜区；(6)MX诱导HaCaT-C细胞株中ABCG2的表达为对照组HaCaT-N细胞株的1．5610．16倍。(P

7、ABCG2及CDl47表达水平升古同OTT八年制博士学位论文中文摘要结论(1)银屑病皮损角质形成细胞中CDl47与ABCG2的表达增高并存在共定位现象；(2)CDl47和ABCG2相结合，结合域位于CDl47跨膜区；(3)CDl47对ABCG2蛋白表达及功能具有调控作用。关键词银屑病，角质形成细胞，CDl47，ABCG2III八年制博士学位论文英文摘要AbjectiveABSTRACTTheExtracellularMatrixMetalloproteinaseInducer(EMMPRIN，CD147，basigin)，animmuno