mir-203与socs3的相互作用及其在hacat细胞中的机制研究

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1、中图分类号—!三尘UDC6I口博士学位论文学校代码!Q§33密级公珏miR-203与SOCS3的相互作用及其在HaCaT细胞中的机制研究AssociationofmiRNA．203withSOCS3andthemechamismsinHaCaT作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导老师：李芳芳临床医学皮肤病与性病学湘雅医院陈翔教授论文答辩日期垄!!：兰!答辩委员会主席中南大学2013年5月f1如、原创性声明JJIIIIIIijllIIIIIIIIIII111111IIIHIIIJY2423849本人声明，所呈交

2、的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢，的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：麴日期：丝!三年—甥翌日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、

3、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。私多作者签名：：导师签名一曰期：丛年±月互目miR-203与SOCS3的相互作用以及其在HaCaT细胞中机制研究摘要【研究目的】microRNAs(miRNAs)是一种类似于siRNA的，长约19～-25个核苷酸的小分子非编码RNA，广泛存在于动植物和哺乳动物体内，它能与靶分子3’端非编码区域(3’．untranslatedregion，YUTR)特异性结合，能抑制转录后翻译或蛋白降解，

4、从而参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢、发育、肿瘤转移等多种生物学过程。估计有1048种miRNAs参与了人类基因的调控。因此，对于microRNAs的作用，尤其是其靶基因的鉴定和研究，是目前研究的主要热点之一。MiR-203是一个皮肤特异性表达的miRNA，并在银屑病的表皮中表达增加，与此同时，SOCS3(STAT-InducedSTATInhibitor3)的表达下降。在肿瘤中的大量研究显示：miR-203具有抑制细胞增殖的作用，并能与特异性的靶分子结合从而在疾病的发生发展中发挥重要作用。鉴于以上研究背景，在本研究中我们主

5、要探讨miR-203与SOCS3之间的关系，以及在人类永生化细胞株(HaCaT)细胞中作用机制。【研究方法和结果】1．基于生物信息学在线软件预测及数据库比对的方法，发现SOCS3基因YUTR区位于miR-203结合的“种子”序列上，预测两者可能存在相互结合从而改变基因表达水平。2．通过荧光素报告基因分析方法，观察miR-203与SOCS3的结合情况，在外源给予‘mimicmiRNA．203’序列和包含SOCS3基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体共同转染HEK293T细胞的实验中，发现荧光素酶报告基因的活性下降。本课题受

6、如下基金资助国家自然科学基金项目号：81071290国家杰出青年科学基金项目号：81225013II3．采用westernblot的方法进一步验证了miR-203对SOCS3表达的影响，采用miR-203的模拟剂瞬时转染HEK293T细胞后，SOCS3的蛋白水平显著降低。4．采用westernblot的方法观察miR-203的模拟剂对STAT3(SignalTransducersandActivatorsofTranscription，aretranscriptionfactors3)信号通路的影响。5．采用流式细胞仪的方

7、法。我们发现miRNA．203模拟剂能增加在S期的细胞数量。6．为进一步了解miRNA．203在银屑病治疗中的作用。阿维A诱导的HaCaT细胞外源性给予miR-203的抑制剂，采用流式细胞仪观察其细胞周期。我们发现阿维A能增加S期细胞数量，减慢细胞增殖，但这种效应被miR-203的抑制剂所逆转。【结论】1：SOCS3基因是miR-203的一个潜在靶基因；2．miR-203负向调控SOCS3，并活化STAT3信号通路；3．阿维A能影响HaCaT细胞的细胞周期，这种作用能被miR-203的抑制剂所逆转；图5幅，参考文献46篇关

8、键词：miR-203；阿维A；SOCS3；STAT3分类号：R751IIIAssociationofm删A．203withSOCS3andtheAbstract：mechamismsinHaCaTBackgroundmicroRNAsarerecentlydiscovered，small，non--co