雷帕霉素-cd96免疫胶束的制备及表征与靶向性初步分析

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1、分类号密级UDC编号南华大学硕士学位论文雷帕霉素-CD96免疫胶束的制备及表征与靶向性初步分析研究生姓名：邓字宇指导教师姓名、职称：唐圣松教授汪煜华博士学科、专业名称：药理学研究方向：肿瘤药理学2012年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作

2、了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博/硕）士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文

3、全文数据库》，并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据万方数据目录（contents）一中文摘要……………………………………………………………1二英文摘要……………………………………………………………3三论文正文1.前言………………………………………………………………52．实验材料…………………………………

4、………………………83．实验方法…………………………………………………………94．实验结果…………………………………………………………155．讨论………………………………………………………………246．结论………………………………………………………………27四参考文献……………………………………………………………28五综述…………………………………………………………………32六硕士期间发表的文章………………………………………………39七致谢…………………………………………………………………40万方数据万方数据主要英文

5、缩略语索引（Abbreviations）英文缩写英文全名中译名RAPARapamycin雷帕霉素ODOpticaldensity吸光度IC5050%inhibitingconcentration半数抑制浓度DMSODimethylsulfoxide二甲亚砜PBSPhosophatebufferedsaline磷酸盐缓冲液CD96Clusterofdifferentiation96CD96mTORMammaliantargetofrapamycin雷帕霉素靶蛋白CCK-8CellCountingKit-8CCK-8试剂

6、盒LSCLeukemiastemcell白血病干细胞mPEGMethoxypolyethyleneglycols聚乙二醇单甲醚AMLAcutemyeloidleukemia人急性髓系白血病DSPEDistearylphosphatidyl-ethanolamine二硬脂酰磷脂酰乙醇胺MALMaleimide马来酰亚胺万方数据万方数据雷帕霉素-CD96免疫胶束的制备及表征与靶向性初步分析研究生：邓字宇导师：唐圣松教授汪煜华博士目的：制备雷帕霉素-CD96免疫胶束并对其进行表征分析，体外探讨免疫胶束对HL-60细胞的靶向

7、特异性。方法：比较成膜法和溶剂蒸发法制备胶束的优劣；采用正交设计对制备处方进行优化，筛选出最佳制备工艺；动态激光散射仪检测径粒、分布和zeta电位；芘荧光探针光谱法测定临界胶束浓度；紫外分光光度法测定载药胶束的包封率和载药量，并考察此法测定雷帕霉素含量的精密度和适用性。在筛选出载药胶束最佳制备工艺的基础上，将CD96单抗与Mal-PEG-DSPE和载药胶束相连接，制备雷帕霉素-CD96免疫胶束；将制备好的空白胶束、载药胶束、免疫载药胶束置于4℃条件下冷藏保存，每隔一段时间重新测量一次粒径、zeta电位和包封率，观察胶

8、束溶液的稳定性；通过WST-8法测定3种胶束对急性髓系白血病HL-60细胞的杀伤作用，初步分析其靶向特异性。结果：成膜法制备的胶束粒径较大且分布不均一，呈多峰分布，粒径在413nm左右。而溶剂蒸发法制备的胶束粒径分布窄，分散性好。溶剂蒸发法制备的空白胶束、载药胶束、免疫载药胶束的平均粒径分别为62.8、78.2和103.1nm，zeta电位分别