反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

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1、反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响作者：胡新华张强杨军刘程伟张志深杨德华【摘要】目的：观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法：应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物（PLGA）和聚乙烯醇（PVA）包载mTOR基因，制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型，随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因，空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体，对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材，常规HE、Verhoeff染

2、色，RTPCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化，TUNEL法观察血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的动态变化。结果：转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少（P＜0.05）；转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少（P＜0.01）；转基因组凋亡细胞较其他组明显增高（P＜0.05）。结论：纳米粒子可以作为转基因载体，反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生，促进VSMC的凋亡。【关键词】雷帕霉素靶蛋白・基因转移，水平・内皮，血管・静脉・

3、;移植，自体・纳米粒子11【ABSTRACT】Objective:Tostudytheeffectofantisensemammaliantargetofrapamycin(mTOR)genetransfectionmediatedbynanoparticles(NP)onneointimalformationinratveingrafts.Methods:NanoparticleantisensemTORgenecomplexwaspreparedwithPLGApackage.Theefficiency,releaseprocessinvitroands

4、izeofthecomplexweredetermined.Autogenousveingraftmodelwasestablishedin72ratsbytransplantinginternalbranchofjugularveintocarotidartery.Threegroupswerestudied:(1)antisensemTORgroup:antisensemTORgenemediatedbyNPweretransfectedintotheveinsbeforeanastomosis.(2)Emptyvectorgroup:theveinweretrans

5、fectedbyemptyvectormediatedbyNP.(3)Controlgroup(notransfection).Thegraftedveinswereharvested3day,1week,2weekand4weekaftertheoperationrespectively.TheexogenousmTORmRNAandproteinexpressionweredeterminedbyRTPCRandWesternblot.Intimalhyperplasia(IH)wereobservedbyHEandVerhoeffstain.Thepresenceo

6、fapoptoticVSMCwasdetectedbyTUNELstain.Results:AntisensemTORgenetransfectionmediatedbynanoparticlecomplexenabledtoinhibitthemRNAandproteinexpressionofmTORgene(P＜0.05),andtheIHwasinhibitedintheveingraftespeciallyduring7d~28d(P＜0.01).Conclusion:Nanoparticleisaneffectivegene11transfectingcarr

7、ier,andantisensemTORgeneexpressioncanpreventtheIHandpromoteapoptosisafterveingrafting.【KEYWORDS】Veins・mTOR・Genetransfer,horizontal・Transplantation,autologous・Nanoparticle・Endothelium,vascular　利用自体静脉行冠状动脉搭桥或肢体旁路转流手术，是目前挽救病人生命和肢体功能的重