sirna使hif-1α基因沉默抑制大鼠视网膜体外新生血管形成的实验研究

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1、目录中文摘要英文摘要英汉缩略语名词对照表前言材料与方法结果讨论结论参考文献综述攻读学位期间的研究成果致谢学位论文原创性声明学位论文知识产权权属声明关于学位论文使用授权的说明siRNA使HIF-1α基因沉默抑制大鼠视网膜体外新生血管形成的实验研究学科分类：儿科研究生：白青青指导教师：周晓光教授中文摘要目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor-1α，HIF-1α)在早产儿视网膜病变（retinopathyofprematurity，ROP）发病中的作用，为ROP的基因治疗寻找新的靶点。方法将化学合成小分子干扰RNA(smallinterferenceR

2、NA,SiRNA)用脂质体介导法转染大鼠视网膜血管内皮细胞，转染的细胞在含化学缺氧剂——二氯化钴（CoCl2）的培养基中培养8h；应用荧光定量聚合酶链反应和Western印迹技术检测转染后HIF-1αmRNA和蛋白的表达量，应用四甲基偶氮唑蓝比色法对细胞增殖活性进行检测分析。正态分布计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较2组间是否存在差异采用t检验。结果成功将siRNA转染大鼠视网膜血管内皮细胞，荧光定量聚合酶链反应技术检测显示，4条siRNA均能不同程度抑制HIF-1α的转录表达，siRNA1、siRNA2和siRNA4组HIF-1αmRNA分别降至空白对照组的16.20%、

3、20.34%和30.49%，与阴性对照组（83.34%）之间差异有统计学意义（t分别为16.786、8.953和4.087，P均＜0.05）。Western印迹技术显示，siRNA1和siRNA2转染的大鼠视网膜血管内皮细胞HIF-1α蛋白表达水平分别为0.496、0.654，明显低于空白对照组（3.402）和阴性对照组（3.510），差异有统计学意义（t分别为6.861、2.893、4.567和5.072，P均＜0.05）。siRNA1和siRNA2组细胞增殖抑制率分别为49.50%和67.41%，明显高于阴性对照组（15.70%），差异有统计学意义（t分别为2.786和6.90

4、4，P＜0.05）。结论化学合成的HIF-1αsiRNA能有效抑制大鼠视网膜血管内皮细胞在缺氧条件下HIF-1α基因及蛋白的表达，从而降低细胞增殖活性。【关键词】早产儿视网膜病变；小干扰RNA；缺氧诱导因子-1α；视网膜新生血管化InhibitoryeffectsofchemicallysyntheticsiRNAofHIF-1αinratretinalendothelialcellsofhypoxicconditionDiscipline：PediatricsName:BaiQing-qingSupervisor:ZhouXiao-guangPerfessorAbstractOb

5、jectiveTostudyblockingeffectsofRNAitechnologyonHIF-1αexpressioninratretinalendothelialcells.MethodsAfterliposome-mediatedsiRNAtransfectionofratretinalendothelialcells，thecellswereculturedinCoCl2-inducedhypoxicconditionfor8hours，theexpressionofHIF-1αmRNAwasdeterminedbyfluorenscencequantitativeP

6、CR，HIF-1αproteinexpressionwasdetectedbyWesternBlot.CellproliferationwasmeasuredwithMTTassay.ResultsRatretinalendothelialcellsweresuccessfullytransfectedwithsiRNA.FluorescencequantitativePCRresultsshowedthataftertransfected48hours，theinterferencegroupofsiRNA1andsiRNA2ontheexpressionofHIF-1αgene

7、wassignificantlyreduced(t=16.786,8.953,4.087，P＜0.05)，WesternBlotresultshowedthatHIF-1αproteinwassignificantlyinhibitedininterferencegroupofsiRNA1andsiRNA2(t=6.861,2.893,4.567,5.072，P＜0.05).Decreasedcelluarproliferationactivitywasobserve