自然杀伤细胞及其免疫调节机制对隐球菌感染影响及相关机制研究

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1、复旦大学博士学位论文自然杀伤细胞及其免疫调节机制对隐球菌感染影响及相关机制研究姓名：徐斌申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：张继明2012-04-03复旦大学博士论文中文摘要第—部分自然杀伤细胞在隐球菌摩染中的变化及其对隐球菌摩染病程的影响一、小鼠肺隐球菌感染模型以及NK细胞耗竭(NKcelldepletedmicemodel)小鼠模型的建立目的建立小鼠肺隐球菌感染模型以及NK细胞耗竭小鼠模型方法C57BI．／6小鼠经腹腔注射2．s％Avertin麻醉后，于小鼠一侧鼻孔内缓慢滴入已调整浓度的

2、菌液(接种量lxl06／tJ、鼠)。对照组小鼠经小鼠一侧鼻孔缓慢滴入无菌PBS，观察小鼠肺部病变、病理变化、脏器真菌载量。同时，C57BL／6小鼠予以腹腔注射anti．NKl．1单抗腹水(150¨L／小鼠)，观察小鼠脾细胞中NK细胞的变化。结果经鼻腔滴入隐球菌液后，小鼠肺部可见肉眼病灶，肺病理切片中可观察到酵母菌，肺组织匀浆培养可见隐球菌菌落形成。小鼠经anti．NKl．1单抗腹水处理后2天，脾细胞中、NK细胞的比例明显下降(>90％)，效果可持续10天以上。结论通过经鼻滴入隐球菌液建立了小鼠肺

3、隐球菌感染模型，经腹腔注射anti．NKl．1单抗建立NK细胞耗竭小鼠模型。复旦大学博士论文二、隐球菌感染时体内自然杀伤细胞数量和功能变化的时相特征以及对于隐球菌感染病程的影响目的系统探讨隐球菌感染后感染灶局部和全身NK细胞数量和功能变化的时相特征，以及对于主要脏器的真菌载量和小鼠生存率的影响方法使用小鼠肺隐球菌感染模型和NK细胞耗竭小鼠模型，将小鼠分为anti．NKl．1未处理和处理组，观察感染后第1、3、7、14天小鼠肺部及脾脏内NK细胞数量、活化状态、脱颗粒情况，观察感染后第1、3、7、1

4、0、14天小鼠肺部和脑部真菌载量变化，观察小鼠生存曲线的变化。结果隐球菌感染后小鼠脾细胞总数、脾细胞中NK细胞数量、肺间质白细胞总数、肺间质白细胞中NK细胞数量均明显增加，而小鼠体内NK细胞耗竭对于脾细胞总数无明显影响，但可显著影响感染第7天时肺间质白细胞总数(P

5、真菌载量在感染早期逐渐增加，感染后10天至14天最为明显，其后有逐渐下降趋势，而anti．NKl．1处理小鼠则随感染时间延长而逐渐增加，两组小鼠在感染第3天、第14天、第28天有显著差异(PO．05)。与anti．NKl．1未处理组小鼠相比，anti．NKl．1处理组的小鼠死亡出现更早且死亡比例更高，两组间差异具有统计学意义(P=O．0007)。结论隐球菌感染时，感染小鼠肺部和全身NK细胞数量明显增加，

6、NK细胞耗竭可影响肺部间质白细胞总数。小鼠肺部隐球菌感染后，小鼠NK细胞均可被活化，NK细胞脱颗粒能力增强，且在感染后第3天时最为明显。小鼠体内NK细胞耗竭后可显著增加感染早期和后期肺部真菌载量，但对脑部真菌载量无影响。体内NK细胞耗竭后可显著影响隐球菌感染小鼠的生存曲线。复旦大学博士论文第二部分自然杀伤细胞在隐球菌摩染中的免疫调节作用及其可能机制一、自然杀伤细胞在隐球菌感染时对适应性免疫的影响目的研究小鼠隐球菌感染时NK细胞对机体适应性免疫反应的影响。方法使用小鼠肺隐球菌感染模型和NK细胞耗竭

7、小鼠模型，将小鼠分为anti—NKl．1未处理和处理组，检测小鼠感染后第7天、第14天时肺间质白细胞中CD4*T细胞内IFNy、IL一4分泌情况，测定小鼠感染后第7天、第14天时肺组织匀浆中IFNy、IL-4的水平。结果小鼠肺隐球菌感染后第7天和第14天，肺间质白细胞中CD4+T细胞胞内IFNy分泌均显著增加(P

8、胞IFNy分泌较未处理小鼠显著减少，而且在感染第14天时较感染后第7天时无明显增加，小鼠肺间质白细胞中CD4*T细胞IL-4分泌则逐渐增加。小鼠肺隐球菌感染后第7天和第14天，肺组织匀浆中IFNy水平均显著增加，呈逐渐上升趋势，而NK细胞体内耗竭后，增加程度显著下降(P