体外富集treg细胞对ctl杀伤mnk45胃癌细胞活性的影响及机制研究

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1、体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究作者：曾冬竹郑峻松王自强吴淼余佩武【摘要】目的体外分析CD4+CD25+Treg(regulatoryTcells)细胞对CD8+CTL(cytotoxicTlymphocytes)细胞杀伤MNK45胃癌细胞株活性的影响及机制。方法通过T细胞纯化柱分选小鼠脾细胞悬液T淋巴细胞，以MACS单阳性和双阳性分选法分别富集CD4+CD25+Treg细胞和CD8+CTL；通过不同浓度CD8+CTL与MNK45胃癌细胞混合培养，筛选有效杀瘤体外培养体

2、系。通过TransNK45胃癌细胞株组成的体外抗肿瘤培养体系中加入CD4+CD25+Treg细胞，以瑞氏染色显微计数的方法观察Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响，结合ELISA法检测各体系穿孔素浓度，分析影响活性的细胞及免疫学机制。结果质量浓度为2.0×105/ml的CTL与1.0×105/mlMNK45胃癌细胞混合培养，CTL能对MNK45胃癌细胞形成明显的杀伤作用(P<0.01)；在此培养体系中以混合培养的方式加入质量浓度为5.0×104/mlCD4+CD25+Treg细胞即可明

3、显抑制培养体系中CTL对肿瘤细胞的杀伤作用；如以TransNK45胃癌细胞株的活性形成明显抑制，在Treg细胞与CTL作用的相应细胞和免疫学机制中，细胞接触机制占主导地位。【关键词】胃肿瘤调节性T细胞细胞毒性T淋巴细胞MNK45胃癌细胞株【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofenrichedCD4+CD25+TregulatorycellsoncytotoxicityofCTLagainstgastriccancercelllineMNK45cellsinvi

4、troandexplorethepossibleunderlyingmechanism.MethodsAfterTcellsenrichment,MACSseparatingsystemspleenTlymphocytes.TheoptimalconcentrationofCTLandthebestcultureconditioneasuringthecytotoxicityofCTLagainstMNK45atdifferentdoses.ThenCD4+CD25+Tregorinaseparate.Th

5、einfluenceofTregoncytotoxicityofCTLmunologicalmechanismightbeinvolved,CTLshol(5.0×104/ml),theamountofkilledMNK45cellsdecreaseobviously(P<0.05).And,Tregcellsmustbeincreased2.0×105/mltoachievethesameinhibitoryeffect.ConclusionsCD4+CD25+Tregulatorycellscou

6、ldexertinhibitoryeffectonCD8+CTLkillingfunctioninvitro,thecelltocellcontactmechanismplaysimportantrolesinmediatingthiseffect.【Keyor;RegulatoryTcells;CytotoxicTlymphocyte;MNK45正常机体的抗肿瘤机制主要包括体液免疫和细胞免疫两方面，两者比较又以后者抗肿瘤活性为主导［1］。在抗肿瘤的细胞免疫机制中，自然杀伤细胞(naturalkille

7、rcells，NKcells)和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes，CTL)作为抗肿瘤免疫的直接效应细胞，发挥着十分重要的作用。NK细胞和CD8+CTL在效应阶段均分别通过穿孔素、Fas/FasL、TNFα、LT(淋巴毒素)和INFγ等途径杀伤肿瘤靶细胞［2］。两类细胞的任何一类活性受到干预，都将影响机体的抗肿瘤效应。正常机体的调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg)是以抑制机体自身反应性T、B细胞的活化，从而参与维持外周耐受而存在的［2］。但是，Treg细

8、胞在参与维持外周耐受的过程中，是否同时抑制了CTL的功能，进而弱化机体抗肿瘤效应，加速肿瘤的形成等，对此经笔者检索，迄今国内外研究尚未完全阐明［2］。本研究通过T细胞纯化柱分选小鼠脾细胞悬液T淋巴细胞，以MACS分选富集CD4+CD25+Treg细胞和CD8+CTL，通过TransNK45胃癌细胞株组成的体外抗肿瘤作用体系中加入CD4+CD25+Treg细胞，观察胃癌细胞株的存活及绝对数量改变情况，评价Treg细