体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究.doc

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1、体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究作者：曾冬竹郑峻松王自强吴淼余佩武【摘要】目的体外分析CD4+CD25+Treg(regulatoryTcells)细胞对CD8+CTL(cytotoxicTlymphocytes)细胞杀伤MNK45胃癌细胞株活性的影响及机制。方法通过T细胞纯化柱分选小鼠脾细胞悬液T淋巴细胞，以MACS单阳性和双阳性分选法分别富集CD4+CD25+Treg细胞和CD8+CTL；通过不同浓度CD8+CTL与MNK45胃癌细胞混合培养，筛选有效杀瘤体外培养体系。通过TransWell分隔培养和混合培养的方式向CTL与MNK45胃癌细胞株组

2、成的体外抗肿瘤培养体系中加入CD4+CD25+Treg细胞，以瑞氏染色显微计数的方法观察Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响，结合ELISA法检测各体系穿孔素浓度，分析影响活性的细胞及免疫学机制。结果质量浓度为2.0×105/ml的CTL与1.0×105/mlMNK45胃癌细胞混合培养，CTL能对MNK45胃癌细胞形成明显的杀伤作用(P<0.01)；在此培养体系中以混合培养的方式加入质量浓度为5.0×104/mlCD4+CD25+Treg细胞即可明显抑制培养体系中CTL对肿瘤细胞的杀伤作用；如以TransWell分隔培养的方式将CD4+CD25+Treg细胞与抗肿瘤

3、培养体系分隔培养，达到同样抑制效能(实验组死亡肿瘤细胞百分率与对照组比较，P<0.05)的CD4+CD25+Treg细胞浓度须≥2.0×105/ml。结论CD4+CD25+Treg细胞能够对CTL杀伤MNK45胃癌细胞株的活性形成明显抑制，在Treg细胞与CTL作用的相应细胞和免疫学机制中，细胞接触机制占主导地位。【关键词】胃肿瘤调节性T细胞细胞毒性T淋巴细胞MNK45胃癌细胞株【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofenrichedCD4+CD25+TregulatorycellsoncytotoxicityofCTLagainstg

4、astriccancercelllineMNK45cellsinvitroandexplorethepossibleunderlyingmechanism.MethodsAfterTcellsenrichment,MACSseparatingsystemwasusedtosortCD8+CTLandCD4+CD25+TregfromspleenTlymphocytes.TheoptimalconcentrationofCTLandthebestcultureconditionwereexploredbymeasuringthecytotoxicityofCTLagainstMNK45at

5、differentdoses.ThenCD4+CD25+Tregwereaddedintotheculturesystemorinaseparatewellintranswellsystem.TheinfluenceofTregoncytotoxicityofCTLwasinvestigatedbycountinginactiveMNK45cells.Moreover,thecellularandimmunologicalmechanismwhichmightbeinvolvedwasanalyzed.ResultsIntheculturesystem,CTLshowedsignific

6、anteffectagainstMNK45(P<0.01).When1.0ml(5.0×104/ml)wasaddedtothisreactionsystem,theamountofkilledMNK45cellsdecreaseobviously(P<0.05).AndwhenTregcellswereculturedseperatlyintheTransWellsystem,Tregcellsmustbe6increased2.0×105/mltoachievethesameinhibitoryeffect.ConclusionsCD4+CD25+Tregulatoryc

7、ellscouldexertinhibitoryeffectonCD8+CTLkillingfunctioninvitro,thecelltocellcontactmechanismplaysimportantrolesinmediatingthiseffect.【Keywords】Gastrictumor;RegulatoryTcells;CytotoxicTlymphocyte;MNK45正常机体的抗肿瘤机制主要包括体液免疫