临床医学论文-体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究.doc

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1、临床医学论文■体外富集Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响及机制研究作者：曾冬竹郑峻松王自强吴淼余佩武【摘要】目的体外分析CD4+CD25+Treg(regulatoryTcells)细胞对CD8+CTL(cytotoxicTlymphocytes)细胞杀伤MNK45胃癌细胞株活性的影响及机制。方法通过T细胞纯化柱分选小鼠脾细胞悬液T淋巴细胞，以MACS单阳性和双阳性分选法分别富集CD4+CD25+Trcg细胞和CD8+CTL；通过不同浓度CD8+CTL与MNK45胃癌细胞混合培养，筛选有效杀瘤体外培养体系。通过TznsWcll分隔

2、培养和混合培养的方式向CTL与MNK45胃癌细胞株组成的体外抗肿瘤培养体系屮加入CD4+CD25+Treg细胞，以瑞氏染色显微计数的方法观察Treg细胞对CTL杀伤MNK45胃癌细胞活性的影响，结合ELISA法检测各体系穿孔素浓度，分析影响活性的细胞及免疫学机制。结果质量浓度为2.0X105/ml的CTL与l・0X105/mlMNK45胃癌细胞混合培养，CTL能对MNK45胃癌细胞形成明显的杀伤作用(P<0.01)；在此培养体系屮以混合培养的方式加入质量浓度为5.0X104/mlCD4+CD25+Treg细胞即可明显抑制培养体系屮CTL对肿瘤细胞的

3、杀伤作汕如以TransWell分隔培养的方式将CD4+CD25+Treg细胞与抗肿瘤培养体系分隔培养，达到同样抑制效能(实验组死亡肿瘤细胞百分率与对照组比较，P<0.05)的CD4+CD25+Treg细胞浓度须22.0X105/ml。结论CD4+CD25+Treg细胞能够对CTL杀伤MNK45胃癌细胞株的活性形成明显抑制，在Treg细胞与CTL作用的相应细胞和免疫学机制屮，细胞接触机制占主导地位。【关键词】胃肿瘤调节性T细胞细胞毒性T淋巴细胞MNK45胃癌细胞株[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofe

4、nrichedCD4+CD25+TregulatorycellsoncytotoxicityofCTLagainstgastriccancercelllineMNK45cellsinvitroandexplorethepossibleunderlyingmechanism.MethodsAfterTcellsenrichment,MACSseparatingsystemwasusedtosortCD8+CTLandCD4+CD25+TregfromspleenTlymphocytes・TheoptimalconcentrationofCTLandt

5、hebestcultureconditionwereexploredbymeasuringthecytotoxicityofCTLagainstMNK45atdifferentdoses.ThenCD4+CD25+Tregwereaddedintotheculturesystemorinaseparatewc11intranswcl1system・TheinfluenceofTrcgoncytotoxicityofCTLwasinvestigatedbycountinginactiveMNK45cells・Mowovet,thecellularan

6、dimmunologicalmechanismwhichmightbeinvolvedwasanalyzed.ResultsTntheculturesystem,CTLshowedsignificanteffectagainstMNK45(P<0.01).When1.0ml(5.OX104/ml)wasaddedtothisreactionsystem,theamountofkiliedMNK45cellsdecreaseobviously(P<0.05)・AndwhenTregcelIswereculturedseperatlyintheTran

7、sWei1system,Tregcellsmustbeincreased2.0X105/mltoachievethesameinhibitoryeffect・ConclusionsCD4+CD25+TregulatorycellscouldexertinhibitoryeffectonCD8+CTLki1lingfunctioninvitro,thecelltocellcontactmechanismplaysimportantrolesinmediatingthiseffect・[Keywords]Gastrictumor;RegulatoryT

8、cells;CytotoxicTlymphocyte;MNK45止常机体的抗肿瘤机制主要包括体液免疫和细胞免疫两方面，两者