脂氧素a4对内毒素攻击的肺泡ⅱ型上皮细胞钠通道的影响

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1、温州医学院硕士学位论文脂氧素A4对内毒素攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道的影响姓名：何谦申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：金胜威2012-05-24温州医学院硕士学位论文脂氧素A4对内毒素攻击的肺泡II型上皮细胞钠通道的影响中文摘要第一部分脂氧素～对人肺腺癌A549细胞上皮钠通道伐p丫亚基影响的剂量效应目的：探讨不同剂量的脂氧素～对内毒素攻击的A549细胞上皮钠通道O【p丫亚基蛋白的影响方法：体外培养A549人肺泡II型上皮细胞，将肺腺癌A549细胞随机分为七组：(1)空白组(无血清的培养基不含任何药物)；(2)LPS(1pg／mL)+乙醇(3．79l／mL)；(3)LPS(199／m

2、L)(4)LPS(1lag／mL)+LXA4(IO。6mol／L)：(5)LPS(1pg／mL)+LXA4(1x10～mol／L)；(6)LPS(1,g／mL)+LXA4(1x10‘8mol／L)；(7)LPS(1lag／mL)+LXA4(1×10一mol／L)。药物干预24h后用蛋白印迹方法检测A549细胞仅pY蛋白的表达。结果：与空白对照组比较，LPS组和LPS+ethanol组O【p丫一ENaC蛋白表达明显降低(P

3、PS+LXA4(1x10一mol／L)、LPS+LXA4(1x10—9mol／L)137。ENaC蛋白表达明显升高(P<0．05)；与LPS+LXA4(1x10‘7mol／L)组LL较，LPS+LXA4(1x10～mol／L)、LPS+LXA4(1x10。8mol／L)、LPS+LXA4(1x10’9m01／L)组的a13，1,．ENaC蛋白表达降低(P<0．05)。结论：、脂氧素～可上调LPS攻击的人肺腺癌A549细胞上皮钠通道蛋白表达，且最佳浓度为lx10～mol／L。关键词：lipoxinA4；LPS；上皮钠通道第二部分脂氧素～对人肺腺癌A549细胞上皮钠通道alil,亚基的影响目

4、的：探讨脂氧素对内毒素攻击的A549细胞上皮钠通道0【p丫亚基的影响温州医学院硕士学位论文方法：体外培养A549人肺泡II型上皮细胞，将A549细胞随机分为五组：①空白组(无血清的培养基不含任何药物)；②溶剂乙醇(ethanol，0．7}tl／mL)组；③LxA4(1×10～mol／L)坌it；@LPS(1gg／mL)；@LPS(1gg／mL)+LxA4(1×10。7mol／L)组。药物干预6h后用Real．timePCR半定量检测A549细胞0【p1，．ENaCmRNA表达；药物分别干预6h，12h，24h后用蛋白印迹方法检测A549细胞0【pY．ENaC蛋白的表达；药物干预24h后用

5、ELISA检测A549细胞cAMP和cGMP含量。结果：(1)药物干预6h后，与空白对照组比较，LPS组cc．ENaCmRNA的表达明显降低(P

6、aC蛋白表达明显升高(P<0．01)；与LPS组相比，LXA4组和ethanol组CcBY—ENaC蛋白表达明显升高(P<0．05)；与ethanol组相比，LXA4组O【p1，．ENaC蛋白的表达明显升高(P<0．05)。药物干预12h与24h的结果与6h的结果类似。(3)药物干预24h后，与空白对照组比较，LPS组cAMP水平明显降低(P

7、：脂氧素～可上调人肺腺癌A549细胞ap^r．ENaCmRNA和蛋白表达，并上调细胞内cAMP水平，增强钠通道的表达。关键词：lipoxinA4；LPS；上皮钠通道；环磷酸腺苷；环磷酸鸟苷第三部分脂氧素～通过AhR受体调控人肺腺癌A549细胞上皮钠通道的影响目的：探讨脂氧素～通过人肺腺癌A549细胞AhR受体调控上皮钠通道的机制方法：体外培养A549人肺泡II型上皮细胞，通过逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)温州医学院硕士学位论