脂氧素a4对内毒素激活的中性粒细胞分泌促炎细胞因子的影响

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1、温州医学院硕士学位论文脂氧素A4对内毒素激活的中性粒细胞分泌促炎细胞因子的影响中文摘要目的探讨中性粒细胞(P心)在全身炎症反应过程中的作用，探索被誉为炎症反应的“刹车信号’’的脂氧素在过度炎症反应过程中对过高的促炎细胞因子血症的调控作用及其机制。方法抽取近2周未服用任何药物的健康志愿者空腹肘静脉血，利用Ficoll—Hypague密度梯度离心法从全血中提取中性粒细胞，并用含10％胎牛血清的培养液制成细胞悬液。实验分三部分进行，第一部分：观察内毒素刺激对中性粒细胞分泌促炎细胞因子的影响，分组如下：①空白对照组：将PMN在培养液中进行细胞培养；②内毒素刺激组(

2、LPS组)：采用5ug／m1LPS刺激PMN进行细胞培养，然后采用ELISA法检测两组上清液中IL-113、TNF_Q浓度。第二部分：不同浓度脂氧素～(L龇)对内毒素激活的中性粒细胞分泌促炎细胞因子的影响，分组如下：①1ug／lL龇浓度组，采用lug／1L龇与PMN+LPS共培养；②10ug／1L矾浓度组，L飙浓度为10ug／1，余同①；③100ug／1L)‰浓度组，L)‰浓度为100ug／1，余同①；④1000ug／1L弛浓度组，L龇浓度为1000ug／1，余同①。同样方法检测各组上清液中IL-1B、TNF-Q浓度。第三部分，观察LPS激活的中性粒细胞在

3、不同时间段内分泌促炎细胞因子的规律及其L弛的抑制规律，实验分组如下：①空白对照组，即将PMN在细胞培养液中进行培养；②LPS组，采用5ug／mlLPS刺激PMN进行细胞培养；③LX～组：通过第二部分的研究获得LXA4预先处理的最适浓度为100ug／L，在第三部分的研究中，我们采用该浓度的LX～预先处理中性粒细胞，然后采用5ug／mlLPS刺激进行细胞培养。三组在4h，6h，8h，16h和24h等时点取上清液，同样方法检测上清液中IL．10和TNF．Q浓度。结果(1)第一部分，空白对照组上清液中IL-113、TNF—Q浓度分别为21．4±1．85pg／ml，

4、15．88±1．52pg／ml；LPS组上清液中IL一1B、TNF—Q浓度分别为120．09±10．0pg／ml，67．594-3．65pg／ml，两组浓度差别具有统计学意义(P

5、．26pg／im，21．49+2．33pg／mi。经统计学处理，与LPS(Sug／m1)组比较，不同浓2温州医学院硕士学位论文度LX～均能不同程度地降低IL一1B、TNF—Q的分泌，差别具有统计学意义(P

6、．43pg／ml，显著高于4h时间点2．54_+0．19pg／ml和2．32+0．28pg／ml，具有显著统计学意义(P

7、是非常重要的炎症细胞，在全身炎症反应过程中扮演非常重要的角色。(2)脂氧素凡能抑制中性粒细胞分泌TNF．Q和IL一113等促炎细胞因子，提示脂氧素凡确能减轻中性粒细胞介导的炎症反应；其抑制促炎细胞因子的分泌作用具有剂量依赖性，但当达到一定浓度后(本研究结果为lOOug／1)，其抑制作用将不再增强。(3)中性粒细胞被激活后，分泌TNF—Q和IL一1B等促炎细胞因子逐渐增强，于一定时间(本研究结果为16小时)达到高峰。(4)脂氧素A4对TNF-Q的抑制作用似乎早于IL-1B(本研究结果为提前2小时)，这提示脂氧素盘对TNF_a的抑制作用可能更为直接，并可能间接

8、地参与对IL-1B分泌的抑制。【关键词】脂氧素A4：中性粒细胞；白