遗传性凝血基因ⅶ与x联合缺陷症和遗传性凝血因子ⅶ缺陷症的分子发病机制研究

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1、温州医学院硕士学位论文遗传性凝血基因Ⅶ与X联合缺陷症和遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症的分子发病机制研究姓名：郑芳秀申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：王明山2012-05-17温州医学院硕士学位论文遗传性凝血因子Ⅶ与X联合缺陷症和遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症的分子发病机制研究摘要遗传性凝血因子缺陷症是一类单基因遗传病，其发病率虽较低，但致残率高，危害性大，且会遗传至后代。对该类疾病进行分子机制研究，不仅为出血性疾病的诊断、预防出血措施的判断、产前筛查等提供理论依据，而且为探索凝血因子合成、分泌及功能和结构间的关系提供了非常有价值

2、的线索。本研究对I例遗传性凝血因子Ⅶ与X联合缺陷症家系和1例近亲结婚导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系进行了表型诊断和分子机制的研究。一、遗传性凝血因子Ⅶ与X联合缺陷症的分子发病机制研究凝血因子Ⅶ和X是维生素K依赖的丝氨酸蛋白酶，在凝血过程中均发挥重要作用。遗传性FⅦ和FX联合缺陷症是一种非常罕见的疾病，由于人类FⅦ和FX基因均定位于13号染色体长臂(13q34)，且FX基因位于FⅦ基因下游约2．8kb处，所以目前文献中报道该病的遗传方式有两种：一种是由FVII和FX基因同时突变所导致，呈常染色体隐性遗传；另一种是由13号染色体

3、长臂异常(包括缺失、易位等)所形成，呈常染色体显性遗传。本文所研究的家系先证者为16岁男性，因误食拌有老鼠药的食物后来院就诊，平素无明显出血症状，其父母为非近亲婚配。凝血常规检查发现PT、APTT明显延长，维生素K依赖的凝血因子(FII、FVII、FIX、FX)促凝活性明显下降，其它凝血指标和因子活性检测均无异常，拟诊断为“老鼠药中毒”予以维生素K1等治疗。在治疗期间多次复查PT、APTT仍明显延长，FⅦ：C和FX：C均维持在5％左右，FII：C和FⅨ：C恢复到正常范围内。基因诊断证实，先证者为FⅦ基因g．11267C>T(A

4、r9277Cys)和FX基因g．28139G>T(Val384Phe)纯合突变，其父亲、母亲和姐姐均为这两个突变位点的杂合子。经检索，发现FⅦ基因Ar9277Cys突变已有报道，但尚未发现与FX基因错义突变Val384Phe相关的报道，且该突变在106名健康对照者中也没有被发现，初步排除了基因多态性的可能，证实FX基因Val384Phe为国际首次报道的突变。Val384位于丝氨酸蛋白酶的保守区，且毗邻于FX的活性位点Ser379。研究表明，邻近催化位点Ser379的空间布局变化可干扰EGF区Ar9439和Ser379之间的氢键

5、，进而影响分子间结构域的相互作用，破坏稳定的FX分子，其具体机制有待进一步研究。温州医学院硕士学位论文二、近亲结婚导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系基因分析凝血因子Ⅶ是由肝脏合成并分泌的一种单链糖蛋白。FⅦ基因位于第13号染色体长臂(13q34)，由9个外显子和8个内含子组成，在外源性凝血途径的启动过程中发挥重要作用。遗传性FⅦ缺陷症是一种常染色体隐性遗传病，由Alexander等于1951年首次报道，男女均可发病，发病率约为1／50万。据最新的FⅦ突变数据库统计，引起遗传性FⅦ缺陷症的突变有200多种，包括错义、无义、剪切位点

6、、启动子、小的插入和缺失等6种突变。本文所研究的家系先证者为41岁男性，体检时发现尿路结石予碎石治疗，平素无明显出血史，父母为姨表近亲婚配。实验室检测PT显著延长，FⅦ：C和FVII：Ag分别为正常对照的3％和137．9％，表型诊断为II型FⅦ缺乏，即CRM+。对FⅦ基因所有外显子及其侧翼序列、5’端和3’端非翻译区进行PCR和测序分析，发现先证者为FⅦ基因g．11348C>T(_Ar9304Trp)纯合突变，其父亲为该突变的杂合子，母亲、大儿子和小儿子均为Ar9304Trp杂合突变和Ar9353Gln杂合多态性。Ar9304

7、Trp突变国际上已有报道，蛋白质空间结构分析表明，位于FⅦ结构保守区的304位Arg被Trp替代后，导致Arg亲水侧链被Trp的疏水侧链替代，使Ar9304附近催化区的III级结构发生改变，影响与TF的结合而导致FⅦ功能异常。关键词：凝血因子Ⅶ；凝血因子X；基因突变；分子机制StudyontheMolecularDeficiencyofFactorPathogenesisofCongenitalCombinedVIIandXandInheritedCoagulationFactorⅦDeficiencyAbstractInhe

8、ritedcoagulationfactorsdeficienciesaremonogeneticbleedingdisorders．AlthoughtheprevalenceofthesedisordersisrelativelyIOW,patientswithsuchdi