遗传性fxii缺陷症分子机制及血小板相关疾病研究

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1、万方数据上海交通大学博士学位论文IIIYIIIH2H8111H110nnl4li2HIHIllItIIIIY2810421InvestigationonthemolecularpathogenesisofinheritedFXIIdeficiencyandtwootherplateletPh．DCandidateStudentIDMajorResearchInterestSupervisorassociatediseasesDoctoralSupervisoryCommittee：DegreeAppliedfor

2、TrainingUnitSubmissionDatePEIPEIJIN0127319360BiochemistryandmolecularbiologyThrombosisandHaemostasisProf．XiMoProfessorQihuaFuProfessorShuhongShenDOCTEROFMEDICINEShanghaiChildren’SMedicalCenterApril，2015万方数据上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得

3、的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：忿觯碲日期：弘I厂年j_月j日万方数据上海交通大学博士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

4、进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于，不保密囱。(请在以上方框内打“4")学位论文作者签名：壁彳私佣指导教师签名：≮枷日期：讷li年s-,qr日日期：刀lf年f月r日万方数据上海交通大学博士学位论文遗传性FXII缺陷症分子机制及血小板相关疾病研究摘要本研究收集了5个遗传性凝血因子XII(coagulationfactorXII，FXII)缺陷症家系，并对此开展了临床表现、家系调查、实验室检测和基因诊断等方面的研究；对所发现的3个导致CR

5、M’遗传性FXII缺陷症的突变位点(c．776G>A，c．799C>G，C．1561G>A)进行了突变蛋白的结构与功能研究，以探讨三个突变导致遗传性FXII缺陷症的分子机制。此外，本研究探讨了血小板膜蛋白GPIblB胞内段调控GPIba酶切的分子机制，并应用全外显子测序方法对一例难治性ITP进行了基因诊断研究。FXII是内源凝血系统的启动因子，遗传性FXII缺陷症是由编码FXII蛋白的基因F12突变所引起的，是一种常染色体隐性遗传性疾病，患者无临床出血表现，多在术前凝血筛查中因APTT延长而发现。本研究对发现的5

6、个遗传性FXII缺陷症进行了基因诊断和分子机制研究。5个先证者FXII活性(FXII：C)和抗原(FXII：Ag)均明显降低，基因诊断发现了F12基因上存在3种基因突变，分别是c．776G>A(p．G259E)、c．799C>G(p．R267G)和c．1561G>A(p．E521K)，其中c．776G>A(p．G259E)、c．799C>G(p．R267G)为国际首次报道。针对发现的基因突变，构建FXII突变表达质粒，在体外探讨三个突变导致遗传性FXII缺陷症的分子机制。转染突变质粒细胞内外的FXII：Ag均明显

7、下降，细胞上清中FXII：C也明显下降，提示三种突变是导致FXII缺陷的原因；RealtimePCR结果显示三个FXII突变体均能正常转录；进一步蛋白降解抑制实验结果显示三个FXII突变体通过蛋白酶体进行降解是导致FXII表达量下降的根本原因；FXII突变体和野生型共转染HEK293T细胞结果显示FXIIR267G和FXIIG259E具有dominantnegativeeffect，然而，这种dominantnegativeeffect的产生并不是由于FXII突变体和野生型形成杂合二聚体而引起的。GPIb．IX．

8、V复合物是引起血小板活化第一步的受体蛋白，在生理止血中起着重要作用。GPIbGt是GPIb—IX—V复合物中最重要的一个亚基，其酶切在血栓形成过程中起着负调控的作用，对于血小板保存及清除也至关重要。目前对于GPIb．IX．V复合物中GPIba酶切调控机制仍不明确。我们前期研究发现的GPIbl3万方数据上海交通大学博士学位论文胞内近膜端可以通过与某个未知蛋白相互作用抑制GP