三种遗传性疾病的基因诊断及分子发病机制研究

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1、上海交通大学博士学位论文三种遗传性疾病的基因诊断及分子发病机制研究研究生学号专业研究方向指导教师指导小组成员申请学位级别培养单位资助基金项目答辩日期郁婷婷0117239224临床检验诊断学遗传性疾病的分子诊断和发病机制陈福祥教授傅启华教授丁秋兰副教授博士学位上海交通大学医学院附属上海第九人民医院国家自然科学基金项目(81000207)2014年05月ShanghaiJiaotongUniVersityDOCToRALDISSERTATIoNThemoleculardiagnOsisandpathOgeneticstudyPh．D

2、CandidateStudentIDMajorOfthreekindsofgeneticdiseasesTINGTINGYU0117239224ClinicalLaboratoryDiagnostic8ResearchInterest：MolecularMechanismandDiagnosticsofGeneticDiseasesSupervisor：ProfessorFuxiallgChenDoctoralSupervisoryCommi位ee：ProfessorQihuaFuAssociateProfessorQiulan

3、DingDegreeAppliedfor：DOCTEROFMEDICINETrainingUnitNinthPeople’sHospitalshan曲ai丁iaotongUniVers时SchoolofMedicineFoundationGrant：NationalNaturalScienceFoundationofChina(81000207)SubmissionDateMav2014上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本

4、论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：柳鸡苟日期：如I斗年4月21日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适

5、用本授权书。本学位论文属于不保密圈。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：匆珐蹭指导教师签名：日期：2口I眸4月21日诤宰磊o、日期：钞l啤怕叫日上海交通大学博士学位论文三种遗传性疾病的基因诊断及分子发病机制研究摘要本研究对导致II型遗传性抗凝血酶(antithrombin，AT)缺陷症的突变热点ATLeu99进行了突变蛋白的结构与功能研究，以探讨ATLeu99突变导致遗传性AT缺陷症的分子机制。此外，本研究收集了石骨症(0steopetr。sis)和x连锁先天性肾上腺发育不良(Xlinkedadrenalhypoplas

6、iacongenita，xL—AHC)等罕见性遗传病家系，并对此开展了临床表现、家系调查、实验室检测和基因诊断(形臃』基因、但钾基因和删基因)等方面的研究；对所发现的化钟基因剪接位点突变c．1798—1G>T进行了转录研究，以探讨其导致石骨症的分子发病机制。AT是人体抗凝系统的主要因子之一，遗传性AT缺陷症是由编码AT蛋白的基因突变所引起，是静脉血栓栓塞症的主要遗传性危险因素。ATLeu99是导致II型AT缺陷症的突变热点，己在多个家系中有报道，本研究构建了多种Leu99突变表达质粒(Leu99Phe、Leu99Val、Leu9

7、9Ala、Leu99Ile以及Leu99Ser)，在体外探讨Leu99突变导致遗传性AT缺陷症的分子机制。实时荧光RT—PCR显示Leu99突变AT基因和野生型AT(ATwT)基因在转录水平无差异；同位素代谢示踪实验显示，Leu99Phe和Leu99Val突变AT表达受损，分别为ATwT的36．9％和13．8％。采用果蝇S2细胞表达系统对ATwT和Leu99突变AT进行表达和纯化。肝素结合试验显示ATLeu99Val、Leu99Ala、Leu99Ile和Leu99Ser突变AT蛋白与低分子量肝素钠的结合分别为相同浓度ATwT的(

8、44．8±3．6)％、(118．9±14．0)％、(15．2±8．8)％和(23．0±8．2)％。表面等离子共振实验显示ATLeu99Val、Leu99Ala、Leu99Ile和Leu99ser突变蛋白与凝血酶的结合分别为相同浓度ATwT的13％、57％、3％和