血友病患者的基因诊断及发病机制的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目血友病患者的基因诊断及发病机制的研究研究生姓名____________________杨春晨指导教师姓名____________________余自强专业名称___________________血液病学研究方向_______________出血及血栓性疾病论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为

2、获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编

3、学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数血友病患者的基因诊断及发病机制的研究中文摘要血友病患者的基因诊断及发病机制的研究中文摘要第一部分重型血友病甲患者的基因诊断及发病机制研究【目的】血友病甲（HemophiliaA,HA）为一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病，在男性人群中发病率为1/5000，女性患者极为罕见。患者自幼可有反复的关节出血，严重者可发生脑出血危及生命。根据血浆中凝血因子VIII活性（FVIII:C）的不同将其分为轻、中、重三型。目前针对本病的治疗主要依赖浓缩凝血因子VIII替代治疗，尤其对于重型血友病患

4、者来说，治疗费用大，生活质量差，所以对血友病患者家系及时进行基因检测，及早的发现携带者，可以有效的减少血友病患儿的诞生。【方法】对2009年至2014年期间在苏州大学附属第一医院血友病中心就诊的43例重型血友病甲男性患者进行FVIII基因突变的检测，其中用长距离PCR法检测22号内含子倒位，双管PCR法检测1号内含子倒位，以及FVIII基因26个外显子及其侧翼序列的直接测序并将测序结果和NCBI基因库（genebank）所公布的FVIII（NM.000132.3）基因序列进比对，寻找基因突变，并排除多态性。【结果】43例患者中，21

5、例患者发现22号内含子倒位(占48.8%)，1号内含子突变未发现。余下22例患者均发现基因突变位点，共有21种突变，其中点突变13例，小片段缺失7例（其中2例为同种突变），小片段插入2例；其中导致氨基酸错义突变5例，无义突变6例，移码突变9例，剪接位点突变2例。其中7种基因突变国际上未见报到，为首次发现。分别为：c.214G>T（E72X），c.215T>C（F73S），IVS5+2G＞A（splicing)，c.2519C>G(S840X)，c.3180delA（V1061Xfs），c.5639delA（N1880Tfs*3），c

6、.6572delA（N2191Mfs*18）。【结论】43例HA患者的基因分析表明FVIII基因突变具有明显的异质性，22号内含I中文摘要血友病患者的基因诊断及发病机制的研究子倒位是重型血友病A患者的主要突变方式。通过分析7例新的突变的发病机制，对血友病A发病机制的的进一步研究提供了基础，血友病甲携带者及孕妇进行快速、准确的诊断打下了基础。【关键词】血友病甲；基因突变；基因诊断第二部分重型血友病A患者凝血因子VIII抑制物检测及其产生影响因素的分析【研究目的】血友病甲（HemophiliaA,HA）是由于凝血因子VIII（FVIII

7、）基因缺陷，导致的血浆FVIII质或量的异常而引起的一种X染色体连锁的隐形遗传性出血性疾病。目前本病主要治疗方法为FVIII制剂的替代治疗，而FVIII抑制物是血友病A患者反复输注FVIII制剂后产生的一种同种抗体，有中和并完全灭活FVIII活性的作用，是血友病A患者发生的最严重的并发症。近年来随着血友病替代治疗的不断推广，重型HA患者接受替代治疗的强度较以往大大增加，因此抑制物的防治也越来越得到重视，在本研究中我们对2004年至2014年期间在我院确诊的重型血友病患者进行抑制物产生影响因素的分析，旨在指导临床上重型血友病A患者的治

8、疗。【方法】收集2009年至2014年期间在苏州大学附属一院血友病中心确诊的43例重型血友病甲（HA）男性患者外周血样本，运用Nijmegen改良的Bethesda方法对43例患者进行FVIII抑制物的检测。进一步分析患者抑制物的发生