大鼠脑缺血再灌注损伤后hif-1α对胶质亚型细胞修复重塑的调控机制

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1、中文摘要1RT-PCR扩增HIF．1C1cDNA，经测序结果与Genebank记载完全一致，构建并酶切鉴定后获得pcDNA3．1．HIF．1Q质粒；2大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤后，经颈外动脉注射HIF．1Q质粒组与PBS组死亡率未见明显差别，但是TTC染色见72h后，治疗组脑梗死面积明显小于对照组，而且存活7d大鼠神经功能缺失评分明显低于PBS对照组；3HIF．1Q对大鼠脑缺血再灌注后胶质亚型细胞的影响：大鼠脑缺血再灌注6h、12h、24h、72h和7d，经颈外动脉注射HIF．1Q质粒组的星形胶质细胞(GFAP阳性细胞

2、)数量均数分别为12．20±2．864、18．80±4．207、30．oo±4．301、38．40±2．881和43．20±6．978，注射PBS组的数量均数为15．80±4．494、18．60±1．673、23．004-4．583、31．60±3．361和29．OO±6．000，二者相同时间点阳性细胞均数做t检验比较，缺血再灌注损伤24h及以后各时间点，HIF．1Ct组与对照组阳性细胞数有差异(P

3、14．40±4．393、20．80±2．280、17．00±3．162和11．60±2．408，PBS对照组阳性细胞均数为8．400±2．302、15．40±2．402、25．80±4．147、37．804-6．181和24．80±4．325，相同时间点两组阳性细胞均数做t检验比较，缺血再灌注损伤24h及以后各时间点两组间有差异，有统计学意义(P

4、20±2．388，PBS对照组阳性细胞均数分别为16．60±2．408、10．60±2．074、7．200±1．924、4．000±1．581和13．20±2．388，二者相同时间点阳性细胞均数做t检验比较，缺血再灌注损伤72h后，二组间阳性细胞数有统计学差异；4HIF．1CI、VEGF与胶质亚型细胞共表达：将石蜡切片行免疫荧光双染色，于激光共聚焦显微镜下观察，发现大量星形胶质细胞(GFAP阳性细胞)与HIF．1Q、VEGF蛋白存在共表达情况，而未见小胶质细胞(Isolectin．B4阳性细胞)和少突胶质细胞(CNPase

5、阳性细胞)中HIF．1Q、VEGF明显表达。结论：1经颈外．颈内动脉注射重组pcDNA3．1．HIF．1Q质粒可以有效的减少大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织的梗死面积。中文摘要2大鼠脑缺血再灌注损伤后，经颈外．颈内动脉注射重组pcDNA3．1-HIF—lQ质粒可以促使星形胶质细胞增加，少突胶质细胞数量增加，并有效抑制小胶质细胞的增殖，起到神经保护作用。3大鼠脑缺血再灌注损伤后，各神经胶质亚型细胞中，HIF．1Q蛋白主要在星形胶质细胞中表达。关键词：脑缺血再灌注；星形胶质细胞；少突胶质细胞；小胶质细胞；缺氧诱导因子．1Q(HIF

6、．1Q)；基因治疗英文摘要TheRegulationMechanismofHIF—latotheSubtypesofGlialCellsReparationafterRatsIschemia—ReperfusionInjuryABSTRACTohiective：Intheexperiment，thevitrorecombinationtechnologywasusedtopreparepcDNA3．1-HIF-laplasmid．Wre嫡ectedHIF．Iaplasmidintothemiddlecerebralarte

7、ry(MCA)occlusionreperfusionofratsthroughexternal-internalcarotidartery．Afterthat，specificityimmunohistochemistrywasappliedtostainforsubtypesofglialcellsofcerebraltissuein6h，12h，24h，72hand7d，respectively．Wethenobservedthechangesineachcellgroup．Inthisprocess，doubles

8、tainingimmunofluoresencetechniquewasusedtostainforHIF-let，VEGF,andsubtypesofglialcells，respectively,andweexaminedtheCO-expressionofthepositivecellsunder