纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研究【摘要】目的观察盐酸纳洛酮对大鼠脑复苏后海马CA1区细胞凋亡及其相关调控基因蛋白表达的影响，探讨盐酸纳洛酮脑保护的分子生物学机制。方法将大鼠随机分成假手术组、单纯脑缺血再灌注组和脑复苏盐酸纳洛酮治疗组，制作大鼠脑缺血再灌注模型，分别用TUNEL和免疫组化法检测各组动物脑复苏后海马CA1区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax、p53、Fas的蛋白表达。结果治疗组大鼠脑组织中凋亡细胞数低于缺血再灌注组，Bcl-

2、2的表达明显高于缺血再灌注组，Bax、p53、Fas的表达低于对照组。结论纳洛酮可能通过促进Bcl-2的表达和抑制Bax、p53、Fas的表达来减少脑复苏后神经细胞的凋亡而发挥其脑保护的作用。【关键词】脑复苏；纳洛酮；凋亡；基因Experimentalstudyofnaloxoneonratcellularapoptosisandthemechanismofgenicregulationafterbrainresuscitation［Abstract］ObjectiveToobservetheeffectsofnaloxoneonratcellularapoptosisandthe

3、expressionoftherelevantregulatotygenesafterbrainresuscitationandtoexplorethemolecularmechanismofnaloxoneonneuroTheratsweredividedinto课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果threegroups:thedummyoperativegroup，the

4、simpledetectthecellularapoptosisandtheprotEinexpressionofBcl-2，Bax，p5andThenumberofcellapoptosisinthetreatmentgroupwaslowerthanthatinischemia-reperfusiongroup，andtheexpressionofBcl-wassignificantlyhigherthanthatinischemia-reperfusiontheexpressionsofBax，p5andFasinthetreatmentgroupwerelowerthant

5、hoseinthecontrastNaloxonecanplayanroleintheprotectionofbrainthroughdiminishingneurocyteapoptosisbypromotingtheexpressionofBcl-andrestrainingtheexpressionofBax，p5andFas.［Keywords］brainresuscition;naloxone;apoptosisgene大量临床研究已证实纳洛酮的脑保护作用，但其脑保护的机制目前尚未完全阐明。近年研究已显示，脑复苏后存在细胞凋亡及其相关基因的表达改变。有关纳洛酮对脑复苏后细

6、胞凋亡及其相关蛋白表达影响的研究，国内、外报道不多。本实验采用TUNEL法及免疫组化法，分别观察纳洛酮对大鼠脑复苏后海马CA1区细胞凋亡及调控凋亡的相关基因Bcl-2、Bax、p53、Fas蛋白表达的影响，从分子生物学角度进一步探讨纳洛酮的脑保护作用。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果1材料与方法实验动物与分组健康Wistar大鼠120只雌雄不拘，体重g，由华中科技大学同济

7、医学院动物中心提供，将大鼠随机分成3组：假伤对照组、缺血10min再灌注2h组及治疗组，3组再分为凋亡细胞组、Bcl-2组、Bax组、p53组、Fas组，每一亚组各8只。1.脑缺血再灌注模型脑缺血再灌注模型［1］方法建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。以6%水合氯醛/100g腹腔内注射麻醉，在大鼠颈部背侧切开皮肤，暴露第一颈椎两侧翼小孔，电凝两侧椎动脉，局部缝合；2h后，动物以乙醚麻醉后，作颈前切口，分离两侧颈总动脉，待动物清醒后，以微动脉夹夹闭两侧颈总动脉，用脑电图检测