纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研

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1、纳洛酮对大鼠脑复苏后细胞凋亡基因调控机制的实验研【摘要】目的观察盐酸纳洛酮对大鼠脑复苏后海马CA1区细胞凋亡及其相关调控基因蛋白表达的影响，探讨盐酸纳洛酮脑保护的分子生物学机制。方法将大鼠随机分成假手术组、单纯脑缺血再灌注组和脑复苏盐酸纳洛酮治疗组，制作大鼠脑缺血再灌注模型，分别用TUNEL和免疫组化法检测各组动物脑复苏后海马CA1区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax、p53、Fas的蛋白表达。结果治疗组大鼠脑组织中凋亡细胞数低于缺血再灌注组，Bcl-2的表达明显高于缺血再灌注组，Bax、p53、Fas的表达低于对照组（P&l

2、t;0.05）。结论纳洛酮可能通过促进Bcl-2的表达和抑制Bax、p53、Fas的表达来减少脑复苏后神经细胞的凋亡而发挥其脑保护的作用。【关键词】脑复苏；纳洛酮；凋亡；基因Experimentalstudyofnaloxoneonratcellularapoptosisandthemechanismofgenicregulationafterbrainresuscitation［Abstract］ObjectiveToobservetheeffectsofnaloxoneonratcellularapoptosisand

3、theexpressionoftherelevantregulatotygenesafterbrainresuscitationandtoexplorethemolecularmechanismofnaloxoneonneuroprotection.MethodsTheratsmyoperativegroup，thesimpleischemia-reperfusion.TodetectthecellularapoptosisandtheproteinexpressionofBcl-2，Bax，p53andFas.Resul

4、tsThenumberofcellapoptosisinthetreatmentgroupia-reperfusiongroup，andtheexpressionofBcl-2ia-reperfusiongroup.AndtheexpressionsofBax，p53andFasinthetreatmentgroupinishingneurocyteapoptosisbypromotingtheexpressionofBcl-2andrestrainingtheexpressionofBax，p53andFas.［Keyi

5、n再灌注24h组（40只）及治疗组（40只），3组再分为凋亡细胞组、Bcl-2组、Bax组、p53组、Fas组，每一亚组各8只。1.2脑缺血再灌注模型脑缺血再灌注模型［1］方法建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。以6%水合氯醛0.5ml/100g腹腔内注射麻醉，在大鼠颈部背侧切开皮肤，暴露第一颈椎两侧翼小孔，电凝两侧椎动脉，局部缝合；24h后，动物以乙醚麻醉后，作颈前切口，分离两侧颈总动脉，待动物清醒后，以微动脉夹夹闭两侧颈总动脉，用脑电图检测脑电波，出现静息脑电波为全脑缺血，否则弃之。10min后松开动脉夹，再灌注24h，缝

6、合皮肤切口。假手术组只分离第一颈椎两侧翼小孔，但不电凝两侧椎动脉，只分离两侧颈总动脉，但不夹闭之。实验中保持大鼠体温（37±0.5）℃，未昏迷或缺血后有癫痫、抽搐等并发症大鼠均放弃。治疗组于夹闭前10min腹腔注射盐酸纳洛酮5mg/kg（北京四环制药厂生产），后每隔4h等量注射一次。假手术组和对照组于相同的时间点分别予等量的生理盐水。1.3标本采取和组织切片制备所有in再灌注后24h，用40g/L多聚甲醛经心脏灌注后断头取脑，于前囟以美蓝标记，冠状切取由前向后2～5mm组织块，固定、脱水、透明石蜡包埋，连续冠状切片，片厚4

7、μm。1.4指标检测采用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞。采用SP法进行Bcl-2、Bax、p53、Fas的免疫组织化学染色。在光学显微镜下观察TUNEL及Bcl-2、Bax、p53、Fas的免疫反应结果，并计数，计算平均阳性率。1.5统计学方法所有数据均以SPSS10.0for统计软件包进行数据统计处理，采用的统计方法为χ2检验。2结果2.1脑复苏后海马CA1区TUNEL阳性细胞计数如表1所示，对照组、治疗组TUNEL阳性细胞较假手术组明显增加，二者与假手术组之间差异均有统计学意义（P<0.05）；同时，

8、治疗组TUNEL阳性细胞较对照组明显减少，两组之间亦存在显著差异（P<0.05）。2.2Bcl-2蛋白在各组的阳性率表达与假手术组比较，Bcl-2蛋白在对照组、治疗组大鼠中均有明显的阳性表达，二者与假手术组之间差异均有统计学意义（P<0.05）；但在治疗组较对照组明显增多，两组之间差异有统计