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时间:2018-11-13
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1、孤啡肽对大鼠脑缺血损伤后细胞凋亡的影响【关键词】孤啡肽;再灌注损伤;细胞凋亡;受体,谷氨酸 [ABSTRACT]ObjectiveTostudytheeffectoforphaninFQ(OFQ)ontheexpressionofglutamatereceptor(GluR)aftercerebralischemicinjuryinrats.MethodsFourtyadulthealthymaleSprague-Dalydividedintosham-operationgroup(n=8),ischem
2、iagroup(n=8),OFQ0.1μggroup(n=8),OFQ1.0μggroup(n=8),OFQ10.0μggroup(n=8).Themiddlecerebralarteryocclusionmodelialthreadmethodandinterferedinedbyimmunohistochemicalassay. ResultsThereoperativegroup.ThenumberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofGluRincr
3、easedfolloicinjury.AftertreatmentberofneuronalapoptoticcellsandtheexpressionofGluRincreasedsignificantlythanthoseintheischemicgroup.ConclusionOFQcouldenhancetheoxideinjuryinducediabyupregulatingtheexpressionofGluR. [KEYSTEAD[5]报道,OFQ参与脑血液循环的调节,但是否影响脑梗死尚未
4、见相关报道。由于谷氨酸为脑内主要兴奋性氨基酸(EAA)的一种,能通过谷氨酸受体1(GluR1),产生兴奋性毒性作用。生理状态下谷氨酸合成、分解、摄取和重吸收是一个动态平衡的过程,这种动态平衡一旦遭到破坏,引起的兴奋毒性就可能导致神经细胞的凋亡或坏死,造成广泛的脑组织病理性损害。本实验旨在研究OFQ对脑缺血再灌注后GluR1表达的影响,探讨其在脑缺血损伤中的作用。现将结果报告如下。 1材料和方法 1.1实验动物 雄性Sprague-Dain,应用脑立体定位仪,在大鼠右侧脑室内埋入微量注射套管并固定,埋
5、管位置为A0.5mm,R/L1mm,H4.2mm。埋管30min后OFQ0.1μg组、OFQ1.0μg组、OFQ10.0μg组分别经内套管一次性注射OFQ(美国RDI公司)10μL,浓度分别为0.01、0.10、1.00g/L。 1.4原位TUNEL染色 大鼠脑缺血再灌注24h,应用40g/L水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉,左心室插管,经主动脉先后灌注生理盐水和40g/L多聚甲醛,取脑,放入含50g/L蔗糖的40g/L多聚甲醛固定液中4℃过夜;再置入含300g/L蔗糖-40g/L多聚甲醛的固
6、定液中至组织块沉底。用德国徕卡冷冻切片机行冠状位冷冻切片,切片厚度30μm,每隔15张切片取1张,贴在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上晾干。按照DendEndTUNEL细胞凋亡检测试剂盒(SantaCruz公司)说明书进行操作,同时设立阳性对照(加1mg/LDNaseⅠ)和阴性对照(不加探针)。荧光显微镜下观察有无发出异硫氰基荧光素(FITC)黄绿色荧光的凋亡细胞。每只大鼠取4张切片,高倍镜下(400倍)在皮质和纹状体区的缺血周边区随机各取4个视野计数凋亡细胞,取其均数。 1.5免疫组化染色 兔抗鼠Glu
7、R抗体购自SantaCruz公司,SABC免疫组化试剂盒、DAB染液购于武汉博士德生物公司。严格按说明书染色步骤操作,光镜下观察胞浆或胞核有棕色颗粒者为阳性细胞。部分切片不加一抗,使用0.1mol/LPBS代替,不出现阳性反应。每只大鼠取4张切片,在400倍光镜下随机观察皮质和纹状体区的缺血周边区各4个视野,LEICAQmol/L,其主要存在于谷氨酸能神经末梢囊泡内,末梢去极化兴奋时,通过Ca2+依赖方式释放谷氨酸,释放的谷氨酸作用于其受体。生理情况下,细胞外谷氨酸浓度约为0.6μmol/L,但病理情况下
8、,当细胞外谷氨酸浓度达到2~5μmol/L时,就能引起神经元的损伤[8]。柳耀泉等[9]报道,脑缺血早期经侧脑室注射痛敏孤啡肽FQ可使感觉诱发电位波幅降低、恢复时间延长、脑梗死体积增大。因此,对局灶性脑缺血大鼠,拮抗兴奋性氨基酸性毒性以及抑制其受体活性,对脑缺血损伤具有防治作用。【
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