1.6二磷酸果糖对大鼠脑缺血再灌损伤后凋亡细胞

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1、1.6二磷酸果糖对大鼠脑缺血再灌损伤后凋亡细胞毕业【摘要】目的探讨1、62磷酸果糖（FDP）对大鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤的作用及其机制。方法雄性SD大鼠90只，随机分为3组：假手术对照组（C组）、脑缺血组（I组）、果糖组（F组），每组30只。I组和F组大鼠在凝断双侧推动脉24小时后夹闭双侧颈总动脉5分钟后重新开放，制作全脑缺血模型，C组只暴露不凝断锥动脉和不夹闭颈总动脉，F组再灌注开始时静脉注射1、6-2磷酸果糖1.5ml/kg，I组及C组分别静脉注射生理盐水1.5ml/kg。各组在再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h时取标本，测定血SOD、MDA含量，并

2、制备脑组织病理切片，采用免疫组织化学染色方法及TUNEL细胞原位凋亡检测法测定P38蛋白和Ref-1蛋白的表达和凋亡细胞数目。结果与C组的比较，I组在再灌注后各时点SOD活性明显降低，MDA含量明显升高（P<0.05），F组变化不明显，但较I组比较均有显著差异（P<0.05）；与C组比较，I组凋亡细胞显著增多（P<0.05）；免疫组化染色显示：与C组比较，I组在再灌注后各时点P38、Ref-1表达均显著增强（P<0.05），F组较C组表达增强但较I组表达显著减弱（P<0.05）。结论1、6-2磷酸果糖对全脑I/R损伤有保护作用，其机理可能与其参与

3、细胞信号转导减弱P38、Ref-1蛋白表达强度有关。【关键词】1、6-2磷酸果糖；脑；缺血/再灌注损伤TheprotectiveeffectsofFDPagainstischemiareperfusioninjuryinratbrainsXueLi,CaiyingminXuerongliangAnestheticDepartment,thesecondhospitalofXi’anJiaoTongUniversity710004China[Abstract]ObjectiveToobservetheprotectiveeffectsofFDPonischemiareperfu

4、sioninratbrainsandstudyitsmechanism.MethodHealthy90ratslydividedinto3groups:sham(groupC),Is-Rs(groupI),FDP(groupF).30inonegroup.Therats’tinutesingroupIandF,theglobalcerebralischemiareperfusionmodelofratsade.Therats’vertebralisunisl/kgchloride1.5ml/kgpleseasuredmunohistochemicalmethods,theex

5、pressionofp38andRef-1andnumbersofapoptosiscellseasuredmunohistochemicalmethodshoiareperfusionjnjuryinrats.Themechanismofightbeitsdecreasingtheexpressionofp38、Ref-1byparticipatingincellsignaltransduction.（作文网zin后重新开放，用4血管法（4-VO）[1]制备全脑I/R损伤模型。C组只解剖暴露双侧椎动脉及颈总动脉。大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠40mg/kg，再灌注开始F组经舌下

6、静脉注射1、6-2磷酸果糖1.5mg/kg（H20040307，浙江浙北药业有限公司），C、I组注射生理盐水1.5ml/kg。密切观察生命体征，观察瞳孔有无变化，呼吸有无增快及神经功能有无异常。瞳孔无变化者予以剔除。再灌注2、6、12、24、48、72h，1部分取新鲜脑组织检测SOD、MDA，1部分以4%多聚甲醛200ml心脏灌注处死，取出完整大脑，固定于4%多聚甲醛中，制备石蜡切片，用于HE染色、凋亡细胞检测和免疫组化染色。免疫组化采用SP法，P38、Ref-1试剂盒均购于美国SantaGruz公司，SP试剂盒购于福州迈新生物工程公司，TUNEL凋亡试剂盒购于美国Oncog

7、ene公司。阳性细胞为棕黄色。（转载自.ＮＳＥＡＣ.中国评价网）脑组织切片中显示细胞浆或细胞核有明显的黄色、棕褐色颗粒或斑片状为P38和Ref-1蛋白阳性。采用德国Leica-Q550E高清晰度彩色图文分析计算机系统对阳性结果进行半定量测定其灰度值。再灌注损伤后1h、2h、6h、12h、24h、48h，用4%多聚甲醛经心脏灌注固定，断头取脑，制备石蜡切片，HE染色观察细胞组织形态学变化。正常细胞结构清晰可见，细胞核为兰色，核膜完整，核仁明显。原位末端标记细胞凋亡试剂盒由美国Oncogene试剂公司提供。