褪黑素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

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1、褪黑素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响【摘要】观察褪黑素(melatonin，MT)对大鼠脊髓损伤(spinalcordinjury，SCI)后脊髓组织细胞凋亡的影响，探讨其对脊髓损伤的保护作用。方法成年T治疗组)。Sham组仅切除椎板未损伤脊髓；A、B两组采用改良Allen法制成大鼠SCI模型，术后立即分别腹腔注射等体积无水乙醇、褪黑素(100mg/kg)；Sham组于术后48h、A和B组于术后8、24、48、72h和7d分别进行神经功能评分和测定伤段脊髓组织凋亡细胞数。结果A组凋亡细胞百分率伤后24h开

2、始升高，48h达到高峰，72h开始下降；B组凋亡细胞百分率伤后24h、48h及72h与A组相比明显减少，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)；B组神经功能比A组有明显提高(P＜0.05)。结论SCI后应用MT可以抑制脊髓组织神经细胞凋亡，从而对脊髓损伤起保护作用。【关键词】褪黑素脊髓损伤细胞凋亡EffectsofMelatoninonRatNeuronsApoptosisAfterSpinalCordInjuryAbstract：ObjectiveToobservetheeffectofmelaton

3、in(MT)onratneuralcellapoptosisafterexperimentalspinalcordinjury(SCI)inordertostudytheprotectiveeffectonSCI.MethodsSixtysixTgroup).ShamgrouponlycutvertebralplateodelodifiedAllentechniqueingroupAandB.Theratsg/kg)ingroupBandthedehydratedalcoholofequalvolumein

4、groupAafterSCI.Apoptosisandnervesfunctioneasuredat8h、24h、48h、72hand7dfollogroupepoints(P＜0.05orP＜0.01)，andthefunctionalrecoveryelatonin；spinalcordinjury；apoptosis本实验旨在观察褪黑素(melatonin，MT)对大鼠脊髓损伤(spinalcordinjury，SCI)后脊髓组织神经细胞凋亡的影响，探讨其对脊髓损伤的保护作用，现报道如下。1材料与方法1

5、.1动物分组健康成年T治疗组(B组)各30只。A、B两组又按SCI后不同时间点(8、24、48、72h和7d)各分为5个亚组，每个时间点6只。1.2模型制备与处理以10％水合氯醛(400mg/kg体重)腹腔注射麻醉。严格无菌操作下取正中切口，切除T8～10椎板，暴露硬膜囊并保持其完整。Sham组仅切除椎板暴露硬膜，未损伤脊髓；A、B两组按照改良Allen法制作中度脊髓损伤模型。B组于SCI后30min内腹腔注射MT溶液(100mg/kg体重，购自晶美上海公司，瑞士Alexis公司生产)，按照褪黑素说明书要求，

6、用无水乙醇对褪黑素进行稀释；A组于同一时间内给予等量无水乙醇。术后常规青霉素40万U肌肉注射，1次/d；人工排尿，2次/d。1.3检测指标及方法A和B组分别于术后8、24、48、72h和7d随机各取6只，用4％水合氯醛麻醉，从原切口暴露脊髓，以损伤处为中心迅速取出伤段脊髓组织约25mm，将标本用冰生理盐水洗净表面血迹，滤纸吸干水分后制备成匀浆，测定凋亡细胞数。Sham组6只全部于伤后48h取髓。细胞凋亡用AnnexinVPI双标记流式细胞仪检测，分别于488nm激发波长和560nm波长以EPICSELite

7、流式细胞仪检测AnnexinV和PI标记的细胞，以不含AnnexinV和PI的孵育缓冲液的脊髓细胞作阴性对照，计算凋亡细胞百分率。1.5统计学分析实验数据用±s表示，用SPSS11.0软件包处理数据，采用方差分析进行组间差异分析。2结果2.1细胞凋亡检测结果细胞凋亡流式细胞仪检测结果见表1。Sham组未见凋亡细胞；A组凋亡细胞百分率伤后24h开始升高，48h达高峰，72h开始下降；B组凋亡细胞百分率伤后24h、48h及72h与A组相比明显减少，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。2.2脊髓功能恢复比

8、较Sham组的脊髓神经功能稳定，其斜板试验角度和BBB评分在SCI后24h分别达到60°和20分左右，表现基本正常。和A组相比，MT治疗组神经功能恢复均有不同程度提高。其中，MT治疗组斜板试验可以观察到运动功能总的提高，至第3天和第7天，运动功能提高，差异具有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，见表2。同时MT治疗组BBB评分也有不同程度的提高，至SCI后3、7d，两组之间差异具有显著性(P＜0.