阿司匹林对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用

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1、阿司匹林对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用作者：王景，夏亚一，李延宏，潘文杰，赵斌【摘要】目的观察阿司匹林对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法选择65只体重为220～250g的adeof65ice(iceintotheaspirintherapygroup(GroupA)，30miceintothenormalsodium(NS)controlgroup(GroupB)and5miceintotheshamoperationgroup(GroupC).Appliedthelootor′sfunctionscaleandtheTU

2、NELimmunohistochemistrytechniquelabeledofthespinalcordinjuringprofileson1st、3rd、7th、14th、28thdaysofpostoperationrespectively.ResultGroupAreducedtheneuronapoptosis，theApoptosisIndex(AI)andtheresultsoflootor′sfunctionscalepareinaldeoxynucheotidetransferasemediateddeoxyuridinebiot

3、innickendlabeling，TUNEL)，观察阿司匹林对慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。1材料和方法1.1慢性压迫性脊髓损伤动物模型的制作65只体重220～250g的健康g/kg)腹腔内注射麻醉。常规消毒铺巾，取后正中切口，切除T10棘突，以平头钻行椎板钻孔，暴露硬膜。用直径3mm、螺距0.5mm、经高压蒸汽灭菌的不锈钢平头螺钉旋入T10椎板，螺钉头端呈水平面。初次旋入时螺钉头面仅与硬脊膜接触，以旋入过程中大鼠后肢不出现跳动，挤捏大鼠尾根部可引出反应，且植入螺钉牢固为度，证明未造成脊髓损伤。以后每隔5d显露螺钉，将螺钉旋入1/2圈约0.2

4、5mm，造成大鼠脊髓渐进性压迫性损伤，于造模后第1、3、7、14、28d取材观察。1.2试剂配置阿司匹林0.18g加入50mL双次蒸馏水，配成浓度为20mmol/L的悬浮液，现用现配。1.3动物分组将上述65只大鼠随机分组：慢性脊髓压迫阿司匹林治疗组(A组，30只)，慢性脊髓压迫生理盐水对照组(B组，30只)，假手术组(C组，5只，仅行椎板钻孔术)。模型制作完成10min后，A组腹腔注射阿司匹林(30mg/kg)，此后每隔5d同途径同剂量再次注射；B组腹腔注射等量的生理盐水。A、B组分别于压迫过程中第1、3、7、14、28天取材，每组每个时间点6只动物。

5、1.4行为学检查慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d对动物进行行为学检查，采用改良的Tarlov评分［1］和斜板试验［2］。1.5病理标本制备分别于不同时间点取材［3］，采用TUNEL观察各组细胞凋亡率。TUNEL检测凋亡试剂盒为武汉博士德产品，严格按照产品说明书步骤操作。1.6图像分析各组各时间点随机计数6张切片(损伤段、损伤上段、损伤下段各2张)，经计算机图像分析系统处理，分别测出每张切片凋亡细胞指数(AI)及每mm2阳性细胞数。结果判定以细胞核中出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞。采用高清晰度彩色病理图像分析系统，进行图像半定量分析。应

6、用凋亡细胞核数估计凋亡细胞，根据下列公式计算：AI＝凋亡细胞核数/总细胞核数。1.7统计学分析所有数据行多样本均数单因素方差分析或两样本均数的t检验，以±s表示，以α＝0.05为检验水准进行双侧检验。使用SPSS10.0统计软件进行统计分析。2结果2.1行为学检查采用改良的Tarlov评分和斜板试验检测结果显示，慢性压迫性脊髓损伤后60只大鼠均出现不同程度后肢瘫痪，排尿障碍。A组运动功能恢复良好，尿潴留有所缓解，与B组比较差异有显著性差异(P＜0.05)(见表1)。表1大鼠慢性压迫性脊髓损伤Tarlov评分和斜板试验结果2.2各组细胞凋亡指数及凋亡率通过

7、对组织染色切片的图像分析和统计学检验，A组的细胞凋亡指数和凋亡率均小于B组(P＜0.05)(见表2～3)。表2大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡指数结果2.3病理学检查光镜下观察B组切片，可见神经元细胞水肿，丧失典型的多极形态。胞核偏位，尼氏小体丧失，噬神经元现象明显。轴突纤维排列结构紊乱，髓鞘脱失，星形胶质细胞和少突胶质细胞增生，有卫星现象。部分神经元细胞缩小呈三角形，胞核浓缩深染，呈缺血性改变，亦可见明显灶性表3大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡率结果出血坏死区及炎性细胞浸润。A组切片可见脊髓灰质轻度水肿，神经元肿胀减轻，有少量胶质细胞和星形胶质

8、细胞增生，白质胶质细胞增生明显，可见病理改变较B组有所减轻(见图1～4)。3讨论