川芎嗪对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护作用及抗细胞凋亡作用

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1、川芎嗪对大鼠肾脏缺血/再灌注损伤保护作用及抗细胞凋亡作用作者：王汉民，谭华，赵洪雯，张鹏，黄朝晖，何丽洁，陈光磊，吴雄飞【摘要】目的:探讨川芎嗪对缺血/再灌注（I/R）损伤大鼠肾功能、肾脏组织形态学、细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:将大鼠随机分为假手术（S）组、I/R组、再灌注后给予川芎嗪（TMPpost）组、再灌注前给予川芎嗪（TMPpre）组，各组分别采用化学法测定血尿素氮和肌酐，光镜和电镜观察肾组织形态学变化，原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡指数，免疫组化和免疫印迹法检测肾脏Bcl2和Bax蛋白的表达.结果:TMPpre组较I/

2、R组血尿素氮和肌肝显著降低，肾小管损伤评分减轻，分别为［（21.8±5.2）vs(31.1±4.4)mmol/L，P＜0.01)］，［（196±55）vs（295±64）μmol/L，P＜0.01）］，［(372±46)vs（563±62），P＜0.01)］；肾小管上皮细胞损伤及超微结构改变明显减轻，肾组织凋亡细胞数明显减少［（13.6±2.9）vs（28.8±4.6），P<0.01）］；Bcl2蛋白表达明显增强［（1.15±0.12）vs（0.88±0.12），P<0.05）］，Bax表达明显减弱［（0.87±0.11）vs（1

3、.15±0.09），P<0.05）］.结论:川芎嗪可明显减轻I/R肾损伤，其保护作用机制与Bcl2蛋白表达增强和Bax蛋白表达减弱介导的肾脏细胞凋亡有关.【关键词】川芎嗪；肾脏；再灌注损伤；细胞凋亡；保护　　【Abstract】AIM:ToexploreLigustrazine(Tetramethylpyrazine,TMP)ontheeffectofinratsorphology,cellapoptosisandexpressionsofrelatedgenesinratslydividedinto4groups,operation(

4、n=10),I/Rmodel(n=10),TMPpost(n=10,intraperitonealTMP32mg/kgper6hafterreperfusionfor30min)andTMPpre(n=10,intraperitonealTMP32mg/kgat45min,8,16,24hbeforeischemia)groups.Bloodureanitrogenandcreatinineicalmethod.Renalcellapoptoticindexinedbymeansofterminaldeoxynucleotidyltrans

5、ferasemediateddUTPnickendlabeling(TUNEL).TheexpressionsofBcl2andBaxinkidneymunohistochemicallyevaluatedandquantifiedby100SX型透射电镜（日本JEOL公司），凝胶图像分析系统（美国Kodak公司）等.　　1.2方法　　1.2.1分组及动物模型制备将40只大鼠随机分为4组，每组10只.S组：假手术对照组；I/R组：缺血再灌注模型组；TMPpost组：在I/R模型的基础上，再灌注30min后腹腔注射川芎嗪，32mg/kg

6、，每6h1次，共4次；TMPpre组：在制备I/R模型前24，16，8h，45min腹腔注射川芎嗪,32mg/kg，I/R造模后不再注射川芎嗪.I/R模型制作参照Basile等方法进行［3］，用30g/L戊巴比妥钠30～50mg/kg腹腔注射麻醉，经腹正中切口暴露双侧肾脏，游离肾蒂，用无损伤动脉夹同时钳夹双侧肾动脉，阻断45min后松开动脉夹.假手术组仅游离双侧肾脏，暴露60min后再关闭腹腔切口.24h后再用戊巴比妥钠麻醉大鼠，采血并摘取左肾，血标本以4000r/min离心10min，分离血清，置-20℃保存用于测定BUN和Cr.取部分肾组

7、织分别用40g/L甲醛和30mL/L戊二醛固定以制备石蜡切片和电镜切片，另取部分肾组织迅速置入液氮中，然后于-80℃冰箱保存，用于提取蛋白.　　1.2.2肾功能测定测定血BUN采用二乙酰一肟显色法，测定血Cr采用碱性苦味酸比色法，应用721分光光度计测定.　　1.2.3肾组织学观察石蜡切片行HE和PAS染色，光镜下观察肾组织形态学改变，参照Paller等方法进行评分［4］，每只大鼠肾组织随机选择10个视野（×200），每个视野下随机选择10处肾小管，共按100个肾小管计分，分数越高表示肾小管损伤程度越严重.电镜切片行醋酸铀和枸橼酸铅染色，在透射

8、电镜下观察肾组织的超微结构变化.　　1.2.4肾组织细胞凋亡检测采用TUNEL检测细胞凋亡指数，参照TUNEL试剂盒说明书进行，显色采用DAB试剂盒进