n6对脊髓损伤后神经细胞凋亡影响

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1、N6对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响研究生：孙振彬专业：外科学导师：赵廷宝教授中文摘要第一部分N6对脊髓损伤后神经细胞凋亡作用的实验研究目的：研究N6(促神经再生因子复合剂)对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法采用Allen’S法经NYU脊髓损伤撞击器制作大鼠急性SCI模型，实验共分4组：假手术组(A组，只摘除椎板未损伤脊髓)，单纯脊髓损伤组(B组)，脊髓损伤+生理盐水治疗组(C组)，脊髓损伤斗N6治疗组(D组)。损伤后72h取材，采用HE染色对脊髓组织进行标记：免疫组化方法检测CaSpaSe3蛋白的表达；逆转录．聚合酶链式反应(R

2、T-PCR)检测凋亡相关基因CaSpaLse3、Fas、Bax、Bcl2、P53mRNA在脊髓组织中的表达变化，Western．Blot检测各组脊髓组织中凋亡相关蛋白Bcl2的表达变化。结果：免疫组化结果显示A组Caspase3阳性表达细胞数很少；B组及C组CaspaSe3阳性表达细胞数较A组明显增加(P

3、Western-Blot结果示：A组Bcl2大量表达，B、C组明显降低，D组较B、C组明显升高，结果具有统计学意义。结论：N6(促神经再生因子复合剂)能明显抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡。关键词：脊髓损伤，凋亡，N6(促神经再生因子复合剂)，凋亡基因。第二部分N6抑制谷氨酸介导培养脊髓神经元凋亡作用的实验研究目的：探讨N6(促神经再生因子复合剂)在谷氨酸介导的脊髓神经元凋亡过程中所起的保护作用。方法：取妊娠13dWistar大鼠的胎鼠，分离出脊髓神经细胞并进行体外原代神经元的纯化培养，建立谷氨酸对培养细胞的损伤模型，观察加用N6保护

4、后细胞形态的变化，用吖啶橙(A0)、溴化已啶(EB)、Hochest荧光染色法、Tunel法观测凋亡细胞数量的变化，CCK8检测细胞活性的变化；实验分为3组：对照组(C组)，谷氨酸损伤组(Glu组)，谷氨酸损伤+N6处理组(N6组)；每组4个平行皿，实验重复3次。结果：C组凋亡细胞少见；Glu组凋亡细胞明显增加，细胞活性明显降低；N6组凋亡细胞数明显减少，细胞活性明显增加，结果均有统计学意义(P<0．05)。结论：促神经再生因子复合剂N6可明显抑制谷氨酸介导体外培养脊髓神经元的凋亡。关键词：脊髓损伤，细胞培养，凋亡，谷氨酸，促神经

5、再生因子复合剂N6。2THEEFFECTOFN6oNCELLAPOPTOSISAFTERPartISPINALCORDINJURYPost-graduate：SunzhenbinSpecialty：Tutor：Surgerypro．ZhaotingbaoABSTRACTEFFECTOFN6oNCELLAPoPToSISAFTERSPINALCORDINJURYobjective：TostudytheeffectofN6(promotenerveregenerationfactors)onapoptosisofnervecellsa

6、fteracutespinalcordinjury．Methods：WeperformedtheacutespinalcordinjurywiththeNYUimpactorundertheAllen，Smethod．Theexperimentalanimalsweredivededintofourgroups，namelysham(A，onlyunderwentlaminectomywithoutweight-dropinjury)；SCIgrou(B)；SClwithNStreatedgroup(C)；SClwithN6一tr

7、eatedgroup(D)．Thespinalcordtissuesofthelesionepicenterweredissected72hoursafterinjury．Hematoxylinandeosin(HE)stainingwasusedtoshowthehistopathologicalchanges，andCaspase3waslabeledthroughimmuneohistochemistymethod；Theexpressionofapoptosis—relatedgeneCaspase3，Fas，Bax，Bc

8、l2，P53WasmeasuredbyRT-PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)andtheexpressionofapoptosis—relatedBcl2withWestern—Blo