紫杉醇对大鼠慢性脊髓损伤后胶质细胞的影响及其机制研究

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1、分类号：R681．5+3密级：学位类别：科学学位团专业学化口0学校代码：学号：学科门类：1O622010602423医学又坪眚科鼻母硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：紫杉醇对大鼠慢性脊髓损伤后胶质细胞的影响及其机制研究TITLETheresearchoftaxoleffectfortheglialcellsafterthechronicspinalcordcompression一级学科：二级学科：论文作者：指导教师：临床医学外科学骨外杨亚林王凯天津医科大学研究生院二O一三年五月学位

2、论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位敝作者弥丝同期7叫乡年臂毛学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同

3、意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：彻多氍嗍沙，多年南≯名辽隰弘弓年5且是日人津医科大学坝：十=学位论义中文捅要●目的1．建立一种理想、实用的慢性脊髓压迫模型，为探索慢性压迫性脊髓损伤(CCSCI)的病理生理机制及其恢复奠定基础。同时于模型L3．L4段脊髓处硬膜下置管，置管处肌肉及皮下固定，延长管部分体外固定并可控性封堵体外延长管管口，以备注射药物使用。2．通过研究紫杉醇(Tax

4、01)对大鼠CCSCI后脊髓组织病理改变、星形胶质细胞增生、胶质瘢痕形成、神经功能恢复情况的作用，初步探讨Taxol对慢性脊髓损伤的保护作用及其可能的机制，为临床治疗提供理论依据。方法1．构建大鼠模型：取健康雌性wistar大鼠56只编号后采用随机数字表法将其分为实验组(n=48)、对照组(C组，n=8)，实验组动物于胸9行后路椎板切除，在T8．TIO间植入抽屉尾翼钩型(drawer-hook，D．H)脊髓压迫装置。每隔7天将螺钉拧入1周(0．5mm)，直至4周，螺钉通过一钢挚片对脊髓施压，每周1次大鼠麻醉后

5、行胸椎正侧位X线片检查，评估装置的位置和胸椎管狭窄程度。对照组的动物只做后路椎板切除，于第4周后行后肢运动功能BassoBeattieBresnahan(BBB)的评分。手术过程中，出现急性脊髓损伤的动物除外。2．48只已制作成功的大鼠慢性脊髓压迫模型，行鞘内置管模型建立完成后，采用随机数字表法分为Taxol治疗组(A组，n=24)、慢性压迫组(B组，n=24)。A组给予Taxol进行鞘内注射。各组每个时间点8只，分别于慢性压迫性脊髓损伤后14、2l、28天进行BBB评分，评价脊髓的功能状态。于第4周选取三组

6、大鼠各2只经过量麻醉后直接处死行TTC染色观察脊髓血运变化。余下的6只取脊髓标本，经病理切片技术行HE、TUNEL及免疫组化染色，观察受压组织的病理变化，检测脊髓中细胞凋亡情况及GFAP在脊髓中的表达情况。进行A组与B组比较，并进行统计学分析。为便于对照，另外取2只正常大鼠，其中1只行TTC染色，1只行病理切片染色。结果1．X线片示压迫装置位置良好，脊髓受压确切。符合后路慢性渐进性压迫模型装置的要求。2．Taxol治疗组21、28天的后肢运动功能BassoBeattieBresnahan(BBB)评分均显著优

7、于慢性压迫组(历O．05)。28dTaxol治疗组与对照组相比，BBB评分无明显降低(俨O．316)。3．TTC染色观察脊髓缺血状况：正常大鼠脊髓断面血运良好；21、28天Taxol治疗组相比慢性压迫组，大鼠脊髓断面脊髓受压侧白质颜色变白区则相对较少。4．脊髓标本HE染色：慢性压迫组脊髓人滓医科大学硕十学位论义灰质中出现神经元丢失，白质疏松，出现不规则的片状脱髓鞘区，胶质细胞增生。Taxol治疗14天后，相比于压迫组脊髓形态较为完整，神经元固缩、溶解、坏死减轻，炎症反应较轻。CCSCI后28d，用Taxol治

8、疗后，脊髓组织结构较为清晰，更多正常的神经元。提示Taxol可以减少慢性脊髓损伤后胶质瘢痕的形成，有助于再生的轴突穿越胶质瘢痕区，建立新的神经通路和功能联系；通过TUNEL染色证明细胞凋亡阳性数量与压迫时间有正性相关。5．免疫组织化学染色显示：21dTaxol治疗组压迫中心区边缘GFAP染色均不同程度减弱，表达降低，其中，Taxol治疗组随时间增加，抑制效果越趋增大，说明Taxol可以抑制脊髓损伤后