黄芩苷对tgf-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中smad3、smad7表达的影响及意义

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1、新乡医学院硕士学位论文黄芩苷对TGF--β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中Smad3、Smad7表达的影响及意义姓名：谭静申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：郭明好201204新乡医学院硕士学位论文黄芩苷对TGF．p1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中Smad3、Smad7表达的影响及意义摘要背景肾小管间质纤维化(ReIlaJInterstiti2LlFibrosis，ⅪF)是各种慢性肾脏病进展至终末期肾病过程中必有和重要的表现。肌成纤维细胞(Myo舶roblaSt，MF)的产生及其在肾间质中的聚积和随后发生的肾小管萎缩被认为是ⅪF的核心因素。MF的来源一直备受瞩目。近10年来，有关

2、报道提出，肾小管上皮．间充质转分化(ep油etlialmesenchyIllal恤1Sition，EMT)可能是MF的主要来源之一。因此肾小管EMT在mF发生发展中的作用日益受到重视。引起肾小管EMT的因素很多，包括损伤、炎症和生长因子等，其中转化生长因子．pl(廿趴sformiIlggrowtllf犯to卜p1，TGF—p1)在肾小管上皮细胞发生EMT中的作用也越来越受到关注。中药提取物黄芩苷(Baicalin)具有抗ⅪF、肺纤维化及肝纤维化的作用，其抗ⅪF的作用机制是否通过抑制肾小管EMT，需要进一步研究。目的本课题采用细胞培养的方法，体外观察黄芩苷对TGF．pl诱导的人近端肾小

3、管上皮细胞(hum锄renaltublllar印iⅡlelialcell，HK．2)转分化作用的影响，探讨黄芩苷抗ⅪF的可能作用机制，为临床应用黄芩苷抗ⅪF提供理论依据。方法选取处于对数期生长的胍．2细胞，分为6个试验组：(1)空白对照组：仅加入胎牛血清的DMEM培养基；(2)TGF．pl诱导组：选择5pg，LTGF-pl作为有效诱导浓度；(3)干预组：5“g／LTGF-pl“OpIn0儿黄芩苷；(4)干预组：5肛g／LTGF．Dl+80pmo儿黄芩苷；(5)干预组：5pg／LTGF—Dl+160pmo儿黄芩苷；(6)干预组：5“g／LTGF．pl+320pmol／L黄芩苷。基于本课

4、题前期研究证实，12h后新乡医学院硕士学位论文TGF．Bl诱导的HK-2即发生了形态学改变，且随着时间的延长，细胞改变越明显。故本实验选取培养72h时的细胞，在倒置显微镜下观察细胞形态变化，并于24h、48h、72h时观察细胞增殖情况：并利用I汀．PCR法检测培养72h时的各组细胞表达Smad3nlI斟A、Smad7mIⅢA情况。结果1．空白对照组细胞培养72h时，细胞形状呈方形或轻度多角形变，具有典型的铺路石样特征。TGF．pl诱导组表现为细胞拉长、肥大，变长梭形，细胞间隙变大，胞浆透明度下降，丧失了铺路石样生长方式。黄芩苷各组细胞变形程度均轻于TGF．pl诱导组，且随着黄芩苷浓度

5、的增加，细胞发生梭形变的程度逐渐减轻，当黄芩苷浓度增加到320pIno帆，时，HK一2细胞形态基本维持正常。2．5肛g／LTGF—Dl诱导组能显著诱导腿一2细胞增殖，并随着时间延长增殖能力逐渐增强，与空白对照组相比有显著性差异(p

6、黄芩苷浓度增加，细胞Srnad3IIl】[矾A表达量逐渐降低，Smad7IIl】5澍A表达量逐渐增加。40“Ino儿黄芩苷组HK．2细胞Smad3lIl】[淑A、Smad7mRNA表达量更接近于TGF．pl诱导组。160pIn0讥。、320“rn01／L黄芩苷组细胞Smad3mRNA、SIIlad7111I矾A表达量更接近于空白对照组，但这两组之间无统计学差异。结论1．5肛g／LTGF—Dl可诱导HK-2细胞转化为长梭形细胞，而黄芩苷可抑制这一改变。2．黄芩苷可抑制TGF．pl诱导的HK．2细胞增殖。3．黄芩苷抑制HK．2细胞转分化作用与SII砌7表达增高和Smad3表达降低有关。4

7、．黄芩苷浓度增加至160邶∞儿时，抑制HK．2细胞转分化作用不再增强。2新乡医学院硕士学位论文关键词TGF．Dl；黄芩苷；smad3；smad7；转分化3新乡医学院硕士学位论文TheEa沁ctandSigni6canceofBaicalinonExpressionofSmad3，Smad7inHumanlbnalTubularEpithelialCeUsInducedobjectivebyTransf．ormingGrowthFactorp1Abstrac