积雪草及益肾康颗粒对 tgf-β1诱导的肾小管上皮细胞 mcp-1及 hgf表达的影响

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1、积雪草及益肾康颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞MCP-1及HGF表达的影响研究生姓名：朱广领导师：张翥教授指导组成员：喻青教授彭贵军副教授学科、专业：中西医结合临床所属院、系：第一临床医学院中国﹒郑州2012年4月1日目录摘要...........................................................-1-Abstract.........................................................-3-前言..

2、.........................................................-6-材料与方法.......................................................-9-结果..........................................................-17-讨论..........................................................-22

3、-结论..........................................................-28-致谢..........................................................-29-参考文献........................................................-30-附录1图片....................................................

4、-33-附录2综述....................................................-40-附录3在读期间论文论著和科研情况...............................-48-摘要摘要背景：肾小管间质纤维化(renaltubuleinterstitialfibrosis,RIF)是各种原因引起的慢性肾脏病(chronickidneydisease,CKD)的共同通路和主要病理特征，是判断肾脏疾病预后的最重要的组织学指标。RIF的严重程度与肾

5、功能衰竭密切相关。因此，探寻早期阻止和延缓RIF进展的新方法、新药物具有十分重要的意义。肾小管上皮细胞-肌成纤维转分化(tubularepithelial-myofibroblasttransdifferentiation,TEMT)被认为是RIF发生的重要机制之一。转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)是TEMT的重要启动和调控因子。单核细胞趋化蛋白l(monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)是单核/巨噬细

6、胞浸润的重要介质，活化的肾小管上皮细胞可分泌大量的MCP-1。MCP-1可上调TGF-β1的表达，通过TGF-β1/Smads信号转导途径，参与TEMT的发生，直接参与肾小管上皮细胞间质转分化。肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)是一种高效的多效性因子，对多种器官的不同类型[1]细胞均有生物学作用。肝细胞生长因子可以通过不同途径抑制肾小管间质纤维化进程。MCP-1、HGF被认为可作为判断RIF的发生、发展和CKD预后的重要指标，日益受到人们的关注。目的：本实验研

7、究积雪草及益肾康颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞中MCP-1、HGF及其mRNA表达的影响，探讨积雪草及益肾康颗粒对RIF防治作用的可能机制，为临床上应用积雪草及益肾康颗粒防治RIF提供理论依据。方法：以福辛普利(蒙诺)为阳性对照，将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)分为：①正常对照组；②TGF-β1刺激组；③积雪草小剂量组；④积雪草大剂量组；⑤益肾康小剂量组；⑥益肾康大剂量组；⑦蒙诺组。培养48h后取出，应用实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequa

8、ntitativePCR，RTFQPCR)技术和免疫细胞化学技术检测细胞MCP-1、HGF的mRNA及蛋白表达。每组实验重复三次。结果：①与正常对照组相比，TGF-β1刺激组细胞从铺路石样上皮细胞向梭形肌成纤维细胞(MyoF)转变，免疫细胞化学染色可见大量胞浆MCP-1染色阳性细胞，而HGF染色阳性细胞显著减少；积雪草大剂量组、益肾康大、小剂量组及蒙诺组细胞形态变化不显著，蒙诺组细胞变化与益肾康大剂量组相似。②与正常对照组相比，药物干预组HGFmRNA表达显著升高(P﹤0.05)，MCP-1mR