积雪草对tgf-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞mmp-2、timp-2表达的实验研究

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1、河南中医学院２０１３届硕士研究生学位论文积雪草对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2表达的实验研究研究生姓名：白继琼导师：张翥教授指导组成员：喻青副教授彭贵军副教授学科、专业：中西医结合临床所属院、系：第一临床医学院２０１３年４月３０日硕士学位论文原创性声明本人所呈交的硕士学位论文，是在导师张翥教授的指导下，独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人

2、承担。特此声明。论文作者（签名）：年月日硕士学位论文使用授权声明本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注：保密论文在解密后适用本授权声明）。特此声明论文作者（签名）：导师（签名）：年月日年月目录目录一中文摘要…………………………………………………………1二英文摘要…………………………………………………………2三前言…………………………

3、………………………………4四正文…………………………………………………………6材料与方法………………………………………………………6结果…………………………………………………………16讨论…………………………………………………………20结论…………………………………………………………25致谢…………………………………………………………26参考文献…………………………………………………………27五附录…………………………………………………………31图片…………………………………………………………31文献综述…………………………………………………………33摘要摘要背景：

4、肾小管间质纤维化（renaltubuleinterstitialfibrosis,TIF）是多种原因引起的肾脏疾病进展至终末期肾病（end-stagerenaldisease,ESRD）的共同途径和主要病理特征。目前认为，TIF的主要特征是细胞外基质（extracelluarmatirx,ECM）的合成增加而降解减少，导致ECM的大量积聚。在某些病理条件下，肾小管上皮细胞（renaltubuleinterstitialcells,RTECs）可丢失细胞表面标志物而表现为肌成纤维细胞（myofibroblast,MyoF）的表型，即发生肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分

5、化（tubularepithelialtomesenchymaltransdifferentiation,TEMT）。研究表明，MyoF可合成大量ECM，导致ECM积聚。而MMP-2/TIMP-2系统在ECM降解过程中发挥着重要作用。目的：本实验研究积雪草颗粒对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白表达的影响，研究积雪草防治TIF的可能机制，为临床上应用积雪草防治TIF提供理论依据。方法：以福辛普利（蒙诺）为阳性对照，将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）随机分为6组：①正常对照组；②TGF-β1诱导组；③TGF

6、-β1+积雪草小剂量组；④TGF-β1+积雪草中剂量组；⑤TGF-β1+积雪草大剂量组；⑥TGF-β1+蒙诺组。培养48h后取出，应用实时荧光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)技术和western-blot技术检测细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表达。每组实验重复三次。结果：①与正常对照组相比，TGF-β1诱导组细胞由铺路石样上皮细胞向梭形肌成纤维细胞转变，积雪草大剂量组细胞形态变化不明显，蒙诺组细胞形态变化与积雪草大剂量组相似。与正常对照组相比，TGF-β1诱导组MMP-2、TIMP-2

7、的mRNA表达明显升高(p＜0.05)；积雪草大剂量组和蒙诺组细胞MMP-2、TIMP-2的mRNA与TGF-β1诱导组相比明显下降（p＜0.05），蒙诺组细胞变化与积雪草大剂量组相似；②与正常对照组相比，TGF-β1诱导组MMP-2、TIMP-2的蛋白表达明显升高（p＜0.05）；积雪草大剂量组和蒙诺组细胞MMP-2、TIMP-2的蛋白表达与TGF-β1诱导组相比明显下降（p＜0.05），蒙诺组细胞变化与积雪草大剂量组相似。结论：①积雪草对TGF-β1诱导的体外培养的肾小管上皮细胞MMP-2、TIMP-2的高表达有抑制作用；②积雪草大剂量组抑制MMP-2、TI