PPARγ活化对TGFβ1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预研究

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1、上海交通大学硕士学位论文PPARγ活化对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预研究姓名：章慧娣申请学位级别：硕士专业：临床医学内科学（肾脏病学）指导教师：王伟铭20070420上海交通大学医学院硕士学位论文高水平。上述结果表明，TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此，有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能为减轻肾间质炎症的途径之一。本研究第二部分观察PPARγ天然激动剂15d-PGJ2和合成激动剂曲格列酮（TGL）对TGF-β1诱导的趋化因子MCP-1和IL-8表达的干预作用。首

2、先通过LDH毒性试验选择15d-PGJ2和TGL的作用最高浓度。研究选择0、0.5、1、2.5、5µM15d-PGJ2和0、0.5、1、2.5µMTGL作为干预浓度，预处理2h，加入5ng/mlTGF-β1分别作用12h或24h收获细胞和上清液。结果显示，5µM15d-PGJ2和2.5µMTGL不影响HK-2细胞MCP-1和IL-8mRNA基础表达和蛋白分泌。TGF-β1作用12h和24h时，2.5µM和5µM15d-PGJ2及2.5µMTGL均能有效干预TGF-β1诱导的MCP-1mRNA表达和蛋白的分泌（p＜0.05）。IL-8的表达与MCP-1相似

3、，2.5µM和5µM15d-PGJ2能显著抑制TGF-β1诱导的IL-8mRNA表达，但TGL干预作用在TGF-β1诱导12h时不明显，TGF-β1诱导24h时2.5µMTGL能显著抑制IL-8mRNA表达（p＜0.05），而5µM15d-PGJ2和2.5µMTGL均能显著下调TGF-β1诱导的IL-8蛋白分泌（p＜0.05）。上述结果表明，PPARγ激动剂15d-PGJ2和TGL作用，即PPARγ的活化均能有效干预TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞趋化因子MCP-1和IL-8的表达，具有有效干预肾间质炎症作用。为明确PPARγ激动剂的干预作用是否通过依赖

4、PPARγ方式的干预机制，我们构建了pcDNA3.1/Zeocin-PPARγ1重组质粒，将其转染HK-2细胞，通过鉴定，成功获得高表达PPARγ1的单克隆细胞株（HK-2/PPARγ1细胞）。研究发现HK-2/PPARγ1细胞在TGF-β1诱导下IL-8mRNA和蛋白分泌与未处理组比较无显著上调，MCP-1mRNA和蛋白分泌与未处理组比较仅轻度上调，提示HK-2/PPARγ1细胞可通过高表达PPARγ1有效地抑制TGF-β1对趋化因子的诱导作用，这为今后寻找新的干预肾间质炎症作用靶点提供了研究基础。通过上述实验，本研究发现TGF-β1能明显上调肾小管上

5、皮细胞炎症相关趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的表达；首次发现PPARγ的活化能有效抑制TGF-β1-VI-上海交通大学医学院硕士学位论文对肾小管上皮细胞趋化因子的诱导作用；研究首次发现成功转染PPARγ1的肾小管上皮细胞可高表达PPARγ1，并可抑制TGF-β1诱导的趋化因子表达，这为今后干预肾间质炎症的治疗提供了理论依据。关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ；转化生长因子β1；肾小管上皮细胞；趋化因子-VII-上海交通大学医学院硕士学位论文INHIBITORYEFFECTSOFACTIVATEDPPARΓONTGF-β1INDUCEDCHE

6、MOTATICFACTORSEXPRESSIONINRENALTUBULAREPITHELIALCELLSABSTRACTRenalinterstitialinflammationandfibrosisarecloselyrelatedtotheprogressionofrenaldiseases.Renaltubularepithelialcellsplayanimportantroleinmediatingrenalinterstitialinflammationandfibrosis.Transforminggrowthfactorβ1(TGF-β

7、1)isconsideredtobeoneofthemostimportantprofibroticcytokinesintubulointerstitialfibrosis.Manycytokinesandgrowthfactorsinrenalfibrosisandrelativesignalingpathwayarewellstudied.However,thereislittleresearchonTGF-β1inrenalinterstitialinflammation.Peroxisomeproliferator-activatedrecep

8、torγisoneofnuclearreceptors.Itcanregulat