ctgf反义寡核苷酸对angⅱ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响

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1、CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导的人近曲肾小管上皮细胞转分化的影响作者：陈珑，刘必成，马坤岭，刘宏，罗冬冬　目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小管细胞转分化的可能影响。方法：采用体外培养的人近曲肾小管上皮细胞株（HK2），分别观察CTGF反义寡核苷酸和AngⅡ干预细胞对细胞CTGFmRNA和蛋白质的表达、细胞内超微结构及细胞α平滑肌肌动蛋白（αSMA）表达的影响。结果:AngⅡ干预HK2细胞48h后，细胞CTGFmRNA和蛋白的表达显著增高（P＜0.01）；AngⅡ干预96h后，细胞超微结构显示出间质细胞样结构

2、；这些作用都可被CTGF反义寡核苷酸显著抑制。AngⅡ可以呈时间依赖性地刺激HK2细胞表达αSMA，这些作用可以被CTGF反义寡核苷酸显著抑制（P＜0.01）。对照组错义寡核苷酸无上述作用。结论：CTGF反义寡核苷酸对AngⅡ诱导HK2细胞转分化具有显著的抑制作用，提示CTGF可能介导了AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞转分化。　　［关键词］人近曲肾小管上皮细胞；血管紧张素Ⅱ；结缔组织生长因子；细胞转分化　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofconnectivetissuegroRNAandprotEinexpress

3、ionicroscopyrespectively.TheeffectofCTGFASonAngⅡinducedcellularultrastructureissiveelectronicmicroscope(TEM).Theexpressionofαsmoothaction(αSMA)munocytochemistry.Thecontrolgroupbledoligonucleotide(SC).ResultsItRNAandprotEIn(P＜0.01,respectively).Ifthecellsulatedesenchymalfeatures.Andth

4、eseeffectscouldbepartiallyattenuatedbyCTGFAS.AngⅡsignificantlystimulatedtheexpressionofαSMAinatimedependentmanner,arkedlyattenuatedbythetreatmententightbeinvolvedintheAngⅡinducedtubularcellEMT.　　Keyanproximaltubularcell;angiotensinⅡ;connectivetissuegros（Cardiff,UK）惠赠。细胞用含10%新生牛血清的DME

5、M培养液培养，每日换液1次，2～3d传代1次。　　1.2主要试剂　　低糖型DMEM培养基（GIBCO公司），新生牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所），AngⅡ(Sigma公司)，CTGF反义寡核苷酸、错义寡核苷酸（全硫代磷酸化，上海捷倍思基因技术有限公司合成）。CTGF反义寡核苷酸（CTGFAS）序列（按　　2.1.2RTPCR结果　　B组AngⅡ刺激HK2细胞48h，细胞CTGFmRNA显著增加，与A组比较有显著统计学意义（A、B组OD值分别为0.144±0.024与0.598±0.033,P＜0.01）；CTGFAS与AngⅡ诱导后表达明显增加的CTGFm

6、RNA结合后，对CTGFmRNA的逆转录和扩增具有显著的抑制作用（C组OD值为0.379±0.032），与B组比较，P＜0.01；而SC（D组，OD值为0.595±0.031）无此作用（图1）。　　2.2CTGFAS对AngⅡ诱导的HK2细胞CTGF蛋白表达的影响　　B组AngⅡ刺激HK2细胞48h，细胞CTGF蛋白表达明显增加，与A组比较有显著统计学意义（A、B组ROI值分别为17.41±5.04与132.45±5.10,P＜0.01）；C组CTGFAS对AngⅡ诱导后细胞CTGF表达的增加具有显著的抑制作用（C组ROI值为82.77±5.09），与B组比较P

7、＜0.01；而SC（D组,ROI值为131.89±5.07）无此作用(图2)。　　2.3CTGFAS对AngⅡ诱导的HK2细胞超微结构改变的影响　　透射电镜观察显示，A组细胞表面微绒毛及细胞*与A组比较,P＜0.01;**与B组比较,P＜0.01　　图1CTGFAS对AngⅡ诱导的HK2细胞CTGFmRNA表达的影响（略）　　Fig1CTGFASattenuatedexpressionofCTGFmRNAnducedbyAngⅡinHK2cells　　内线粒体丰富,粗面内质网稀少；AngⅡ处理48h后与A组比较，细胞表面微绒毛减少，细胞内粗面内质网增多（见图3a

8、箭头所指），线粒体减少，