血管紧张素-(1-7)对低氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

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1、血管紧张素-(1-7)对低氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响摘要目的观察血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对氯化钴(cobaltouschloride，CoCl2·6H2O，Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化的影响并探讨其可能的机制。方法：体外传代培养5NRK52E细胞，按2×10/ml浓度接种于六孔板中，并随机分为对照组、Co组、Ang-(1-7)、Co+Ang-(1-7)组四组，Ang-(1-7)终浓度均为-6-410mol/L，Co终浓度为10mol

2、/L。①对照组：NRK52E培养液培养细胞，无任何干预因素；②Co组：NRK52E培养液中加入氯化钴；③Ang-(1-7)组：NRK52E培养液中加入血管紧张素-(1-7)；④Co+Ang-(1-7)组：NRK52E培养液在氯化钴基础上加入血管紧张素-(1-7)。每组分别在试验第1d、3d、6d观察细胞爬片，进行如下检测：（1）采用免疫细胞化学SABC染色法观察各组细胞α-SMA、低氧诱导因子-lα(hypoxiainduciblefoctor-lα，HIF-lα)、p-ERK1/2的表达；（2）

3、酶联免疫吸附法检测细胞上清液中胶原Ⅰ（ColⅠ）的含量；（3）Westernblotting蛋白印迹法检测测定p-ERK1/2蛋白表达水平。结果：（1）免疫细胞化学检测结果：①α-SMA在各组的表达：培养1d、3d、6d后，对照组未见染色阳性细胞，Ang-(1-7)组与对照组类似；Co组细胞随培养时间延长α-SMA表达也增加，但1d，3d与同时间点对照组比较，均无统计学意义；6d时Co组表达α-SMA显著高于对照组（P<0.05）；与同时间点Co组相比，Co+Ang-(1-7)组细胞α-SMA1表

4、达明显降低（P<0.05）；培养细胞1d，3d时，四组细胞α-SMA相比变化无统计学意义，（HIF-lα、ColⅠ、p-ERK1/2与此相同）故后续研究细胞培养时间均为6d；②各组HIF-lα表达的变化：培养6d后，对照组未见染色阳性的细胞，Ang-(1-7)组与对照组类似；Co组细胞HIF-lα表达较正常组明显增多（P<0.05），Co+Ang-(1-7)组HIF-lα表达减少明显（P<0.05），差异有统计学意义；③NRK52E细胞p-ERK1/2的表达：培养6d后，正常组及Ang-(1-7)

5、组均不表达p-ERK1/2；Co组细胞p-ERK1/2表达明显上升，差异有统计学意义（P<0.05），Co+Ang-(1-7)组细胞p-ERK1/2表达减少明显（P<0.05），差异有统计学意义；（2）ELISA检测结果：培养6d后，Ang-(1-7)组与对照组上清液中ColⅠ的含量无明显改变，Co组细胞上清液中ColⅠ含量升高明显，差异有统计学意义（P<0.05）；，Co+Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ含量减少明显，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）Westernblotting

6、蛋白印迹法检测结果：细胞培养6d后，与对照组比较，Ang-(1-7)组p-ERK1/2的表达无明显改变，Co组p-ERK1/2表达显著增强（P<0.05），与Co组比较，Co+Ang-(1-7)组p-ERK1/2的表达减少明显，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：(1)Ang-(1-7)能抑制Co诱导的肾小管上皮细胞转分化；(2)Ang-(1-7)能减少Co诱导的NRK52EⅠ型胶原的分泌；(3)其作用可能是通过p-ERK1/2信号通路实现。关键词：肾小管上皮细胞转分化低氧低氧诱导因子-lα血

7、管紧张素-(1-7)2Influenceofangiotensin-(1-7)onhypoxicinducedrat’stubularepithelialmyofibroblasttransdifferentiationAbstract:objectiveTransferundertheeffectoftheinvestigationandpossiblemechanismsofangiotensin-(1-7)causedbynormalrenaltubularepithelialcells(t

8、heNRK52E)cobaltchloride(CO)hypoxia.ThemethodoftrainingNRK52Ecellsintocontrolgroup,thecombinedgrouptojointlyincreaseofANG-(1-7)andAng-(1-7).Hypoxia-induciblefactor-Iα(HIF-1α),theoxygenbalanceofthemasterregulatormeasuringhypoxiestatusflag.Invert