血管紧张素-(1-7)对压力负荷增高大鼠血管紧张素ⅱ及受体的影响

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1、http://www.paper.edu.cn血管紧张素-(1-7)对压力负荷增高大鼠血管紧张素Ⅱ及1受体的影响何建桂，马虹，黄艺仪，何小洪，廖新学，曾武涛广东省广州市，中山大学附属第一医院心内科，510080摘要：目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对压力负荷增高大鼠血管紧张素Ⅱ及受体的影响。方法采用腹主动脉缩窄术制成压力负荷增高大鼠模型，45只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、Ang-(1-7)治疗组。Ang-(1-7)治疗组大鼠通过置入式微量泵，经颈静脉插管持续给予-1-1Ang-(1-7)，剂量为25μg.kg.h

2、，共4W。假手术组和模型对照组经微量泵中给予同量的生理盐水。术后4周检测大鼠左心室重量/体重比、血浆及心肌血管紧张素Ⅱ浓度、并采用逆转录-聚合酶链反应检测左心室心肌血管紧张素Ⅱ1型(AT1)、2型(AT2)受体mRNA的表达水平。结果与假手术组比较，模型对照组术后4周心肌血管紧张素Ⅱ浓度及心肌AT1受体mRNA的表达水平明显增高，左心室重量/体重比也明显增高；与模型对照组比较，Ang-(1-7)治疗组术后4周血浆及心肌血管紧张素Ⅱ浓度无明显变化，但心肌中AT1受体mRNA的表达水平降低，左心室重量/体重比也明显降低。心肌中AT2受体mRNA的

3、表达在3组中无明显差异。结论外源性Ang-(1-7)可减轻压力负荷增高所致的心肌肥厚，这一作用可能与它减少心肌中AT1受体表达有关。关键词：血管紧张素-(1-7)；肥大，左心室；血管紧张素Ⅱ；受体近年对肾素-血管紧张素系统(RAS)深入研究发现，体内血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)可向2个不同的方向转化，在血管紧张素转换酶(ACE)作用下产生AngⅡ，也可在肽链内[1]切酶作用下产生血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]。已有的研究表明，Ang-(1-7)具有[2,3]许多与AngⅡ相拮抗的生理作用，可能是AngⅡ的内源性抑制因子。那么Ang-

4、(1-7)是否通过影响AngⅡ及受体而发挥的其作用呢？为此我们设计在压力负荷增高大鼠模型上，观察外源性Ang-(1-7)对AngⅡ及受体的影响。1材料与方法1.1实验材料：雄性SpragueDawley大鼠，8周龄，体重250～300ｇ，由中山大学实验动物中心提供。Ang-(1-7)购于Sigma公司，置入式微量泵（2ML4型）购于美国ALZET公司，AngⅡ放射免疫试剂盒购自中国同位素公司北方免疫试剂研究所，批内变异系数<5%，批间变异系数<10%。1．2动物模型及分组：45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组和Ang-(1-7)治疗

5、组，每组15只。采用腹主动脉缩窄术增高心脏压力负荷，手术方式参[4]照文献报道的方法进行，使缩窄处动脉保留直径约0.8mm空隙，假手术组大鼠在游离腹主动脉后不缩窄。Ang-(1-7)治疗组大鼠于腹主动脉缩窄术后第1天开始给药，1基金项目：教育部博士点基金资助课题（20020558064）及广东省医学科研基金(A2003164)资助通信作者：何建桂，E-mail：hejiangui@163.com-1-http://www.paper.edu.cn将Ang-(1-7)溶于2ml生理盐水后放入渗透性微量泵内，埋置入颈背部皮下，并经穿-1-1行于颈

6、部皮下的颈静脉插管持续给药，剂量为25μg.kg.h。假手术组及腹主动脉缩窄组经微量泵只给予同量的生理盐水。1.3左心室重量/体重比值检测：在腹主动脉缩窄术后4周处死。迅速开胸游离心脏，沿房室环剪去心房及右室游离壁，滤纸吸干后用电子天平称取左心室(包括室间隔)重量，并与体重相除计算左心室重量/体重比值(mg/g)。切取左心室组织放于液氮冷冻，-70℃保存。1.4血浆及心肌AngⅡ浓度测定：处死大鼠前从动脉取血2ml,注入冰水浴冷却的、预先加有抑肽酶抗凝管中,摇匀,4℃,1000r低温离心机离心15min,分离血浆置于-20℃冰箱保存待测血浆A

7、ngⅡ浓度。取左心室游离壁心肌，每100mg加入生理盐水1ml，低温匀浆，匀浆液中加抑肽酶，煮沸10min，3000r离心,取上清液置于-20℃冰箱保存待测心肌AngⅡ浓度。血浆及心肌AngⅡ浓度测定采用放射免疫方法检测，严格按试剂盒说明书操作。1.5心肌AT1、AT2受体mRNA的表达：待测定的心肌组织快速放入液氮冷冻保存，后移入-70℃冰箱存放。采用异硫氰酸胍一步法提取心肌组织总RNA(总RNA提取试剂盒购于BBI公司)。采用MMLV一步法RT-PCR试剂盒(购于上海生工公司)进行逆转录和扩［5,6］增。引物设计参照文献，由上海生工公司合

8、成并纯化，AT1受体引物P1：5’-GCCCTTACTCTTCTGCTGA-3’，P2：5’-TCGATGCTGAGACACGTGAG-3’,扩增片段365bp。A